Abstract:
การวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อคัดแยก จำแนกและศึกษาเปรียบเทียบประสิทธิภาพเชื้อราที่มีคุณสมบัติในการผลิตเอนไซม์เซลลูเลสจากดิน ในพื้นที่ป่าเขื่อนสิรินธร จังหวัดอุบลราชธานี โดยทำการคัดแยกเชื้อราบนอาหารสังเคราะห์ Potato Dextrose Agar (PDA) เติม Carboxymethyl Cellulose (CMC) และ Avicel (Av) บ่มที่อุณหภูมิ 30 ํC เป็นเวลา 3-7 วัน ตรวจสอบลักษณะเชื้อราด้วยเทคนิค slide culture และการเจริญบนอาหารเลี้ยงเชื่อจำเพาะ 3 สูตร คือ PDA Malt Extract Agar (MEA) และ Czapeks Solution Agar (CZA) จากนั้นตรวจให้ชื่อวิทยาศาสตร์ พบว่าจำแนกเชื้อราได้ 10 สกุล 30 ชนิด คือ Aspergillus sp. 14 ชนิด (A. carneus, A. cervinus, A. fumigatus Fresenius, A. fumigatus var.ellipticus, A. niger, A. niveus, A. ornatus, A. oryzae, A. parasiticus, A. pulvinus, A. thomii, A tamari, A. sp. isolate1, และ A. sp. isolate2) Penicillium sp. 6 ชนิด (P. decumbens, P. jensenii, P. funiculosum, P. sp. isolate 1, P. sp. isolate2, P. sp. isolate3) Arthroderma sp. และ Trichoderma sp. อย่างละ 2 ชนิด (Arthroderma sp. isolate 1, Arthroderma sp. Isolate2, T. sp. Isolate1, T. sp. Isolate2) นอกนั้นอย่างละ 1 ชนิดคือ Acremonium sp., Bispora sp., Colletotirchum sp., microsporum sp., Rhizopus oligosporus, และ Trichothecium roseum จากการศึกษาผลของอุณหภูมิต่อการเจริญพบว่า เชื้อรา 14 ชนิดเจริญได้ที่อุณหภูมิ 45 ํC และ Acremonium sp. เท่านั้นเจริญได้ที่อุณหภูมิ 60 ํ C แสดงว่ามีคุณสมบัติทนทานต่ออุณหภูมิสูงได้ดีกว่าเชื้อราชนิดอื่น
ผลการศึกาเปรียบเทียบประสิทธิภาพเชื้อราที่คัดแยกได้ในการผลิตเอนไซม์เซลลูเลสด้วย Congo-red test และ Lugols iodine test ที่ pH 3.0 7.0 และ 10.0 บ่มที่อุณหภูมิ 30 ํC และ 45 ํC พบว่า Acremonium sp. สามารถผลิต endo-cellulase ได้ และ P. sp. isolate 1 ผลิต exo-cellulase ได้ในสภาวะกรด กลางและเบสได้ดีที่สุด โดยที่อุณหภูมิ 30 ํC วัดเส้นผ่านศูนย์กลาง (Ø) วงใสได้ 10.0 15.0 และ 10.0 มม. และ 8.0 11.0 และ 6.0 มม. ตามลำดับ และที่อุณหภูมิ 45 ํC วัด Ø วงใสได้ 5.0 16.0 และ 5.0 มม. และ 6.0 8. และ 3.0 มม. ตามลำดับ นอกจากนั้นพบว่า A. niger และ Acremonium sp. สามารถผลิตเอนไซม์ไซลาเนสได้ที่ pH 3.0 วัด Ø วงใสวัดได้ 13.0 และ 7.0 มม. ตามลำดับ ส่วน A. niger และ A. tomii ผลิตอะไมเลสได้สูงสุดที่ 45 ํ C ที่ pH 3.0 7.0 และ 10.0 แสดงว่า Acremonium sp. และ A. niger มีประสิทธิภาพในการผลิตเอนไซม์เซลลูเลส ไซลาเนสและอะไมเลสได้
The objectives of this study were screening, identifying and studying the effectiveness of cellulolytic fungi isolated from soil in the forest of Sirindhon Dam, Ubon Ratchathani. The soil fungal was isolated by using potato Dextrose Agar (PDA) supplemented with Carboxymethyl Cellulose (CMC) and Avicel (Av) incubated at 30 ํ C for 3 to 7 days. The obtained fungal was screened and identified by using slide culture technique for investigating fungal morphology and fungal growth comparatively on PDA, malt Extract Agar (MEA) and Czapeks Solution Agar (CZA) as selective media. Ten genus of thirty fungal species were identified as follow: fourteen Aspergillus sp. (A. carneus, A. cervinus, A. fumigatus Fresenius, A. fumigatus var.ellipticus, A. niger, A. niveus, A. ornatus, A. oryzae, A. parasiticus, A. pulvinus, A. thomii, A. tamari, A. sp. isolate 1, A. sp. isolate2) six penicillium sp. (P. decumbens, P. jensenii, P. funiculosum, P. sp. isolate1, P. sp. isolate2, P. sp. isolate3) two Arthroderma sp. and Trichoderma sp. (Arthroderma sp. isolate1, Arthroderma sp. isolate2, T. sp. isolate1, T. sp. isolate2) and acremonium sp., Bispora sp., Colletotirchum sp., Microsporum sp, Rhizopus oligosporus, and Trichothecium roseum, The results showed that fourteen fungal were grown at 45 ํC and only Acremonium sp. still grown incubation at 60 ํ C.
The isolated fungal was cultured in liquid medium and determined by using Congo-red test and Lugols iodine test (pH 3.0, 7.0 and 10.0) at 30 ํ C and 45 ํ C for a comparative study on effective cellulose production. Acremonium sp. and P. sp isolate 1 were found to give the greatest yields of endo-cellulase and exo-cellulase through out pH ranging from 3.0, 7.0 and 10.0 incubated at 30 ํC and 45 ํ C. The diameter of clearing zone was measured. Acremonium sp. and P. sp. isolate 1 showed clear zone measured at pH ranging from 3.0, 7.0 and 10.0 with a diameter of 10.0, 15.0 and 10.0 mm and 8.0, 11.0 and 6.0 mm at 30 ํ C, respectively. The diameter of clearing zone was measured of 5.0, 16.0 and 5.0 mm and 6.0, 8.0 and 3.0 mm at 45 ํ C, respectively. The A. niger and Acremonium sp. had ability to produce exlanase under acid conditions (pH 3.0) measured diameter as 13.0 and 7.0 mm at 30 ํ C, respectively. A. niger and A. tomii were found to produce the greatest amylase at 30 ํ C and 45 ํ C under acid, neutral and basic conditions. The results revealed that Acremonium sp. and A. niger had ability to produce cellulose, xylanase and amylase so far.