การคัดเลือกและสภาวะที่เหมาะสมในการผลิตเอนไซม์ไคโตซาเนสจากแบคทีเรียในกลุ่ม Bacillus spp. ที่แยกได้จากถั่วเน่า

Name: จิติมนต์ ไทรตระกลู

keyword: ไคโตซาน

ThaSH: แบคทีเรียวิทยา

; ไคโตโอลิโกแซคคาไรด์

ThaSH: แบคทีเรีย

; เอนไซม์ไคซาเนส

ThaSH: ถั่วเน่า

; chitosan

; chito-oligosaccharide

; chitosanase

; bacillus spp.

Abstract: ไคโตโอลิโกแซคคาไรด์ (Chitooligosaccharides) เป็นคาร์โบไฮเดรตที่ได้จากการสลายตัวของไคตินหรือไคโตซาน การเตรียมไคโตโอลิโกแซคคาไรด์ด้วยเอนไซม์นั้นเป็นวิธีที่ดีกว่าการใช้วิธีทางเคมี ทั้งนี้เนื่องจากได้ผลผลิตที่สูงและมีคุณภาพที่ดีกว่า โดยปกติแล้วไคโตโอลิโกแซคคาไรด์ที่ผลิตได้โดยเอนไซม์ไคโตซาเนสดังกล่าวนี้ สามารถนำไปประยุกต์ใช้ในอุตสาหกรรมอาหารและยา เป็นต้นการวิจัยครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อคัดแยกแบคทีเรียที่สามารถผลิตเอนไซม์ไคโตซาเนสจากถั่วเน่า ศึกษาสภาวะที่เหมาะสมต่อการผลิตเอนไซม์ และศึกษาสภาวะที่เหมาะสมต่อการทำงานของเอนไซม์ ผลการศึกษาวิจัยครั้งนี้สามารถแยกแบคทีเรีย 2 ไอโซเลท คือ TCR 1.3 และ TCM 1.2 โดยพบว่าแบคที่เรียดังกล่าวมีกิจกรรมของเอนไซม์สูงสุดเท่ากับ 0.302 U/ml และ 0.265 U/ml ตามลำดับ เมื่อนำแบคทีเรียดังกล่าวนี้ไปศึกษาลักษณะรูปร่างใต้กล้องจุลทรรศน์ พบว่าเป็นแบคทีเรียแกรมบวก มีลักษณะรูปท่อน มีโคโลนีค่อนข้างกลม ขอบหยัก และผิวหน้าไม่เรียบ ทั้งนี้คาดว่าแบคทีเรียดังกล่าว น่าจะอยู่ในกลุ่มของ Bacillus spp. ผลจากการนำแบคทีเรียไอโซเลท TCR 1.3 และ TCM 1.2 ไปศึกษาสภาวะที่เหมาะสมในการผลิตเอนไซม์ไคโตซาเนส พบว่าสภาวะที่เหมาะสม คือ ใช้ไคโตซานเป็นแหล่งคาร์บอนที่ร้อยละ 1.5 (W/v) ใช้สารสกัดจากยีสต์เป็นแหล่งไนโตรเจนที่ร้อยละ 1 (W/v) และระดับความเป็นกรดเบสที่เหมาะสม คือ 6.0 ทั้งนี้พบว่าสภาวะที่เหมาะสมในการทำงานของเอนไซม์ไคโตซาเนส คือ ความเป็นกรดเบสที่ 5.0 - 6.0 โดยให้กิจกรรมสูงสุดเท่ากันคือ 1.11 U/ml ทั้งในแบคทีเรียไอโซเลท TCR 1.3 และ TCM1.2 โดยมีสภาวะเสถียรของกรดเบส คือ 4.0 - 7.0 ผลของ อุณหภูมิที่เหมาะสมต่อการทำงานของเอนไซม์ คือ ที่อุณหภูมิ 50 - 60 องศาเซลเซียส ให้กิจกรรมเอนไซม์สูงที่สุดคือ 1.02 U/ml ทั้งในแบคทีเรียไอโซเลท TCR 1.3 และ TCM1.2 โดยสภาวะที่เสถียรของอุณหภูมิ คือ ที่อุณหภูมิ 0 - 30 องศาเซลเซียส ทั้งนี้แบคทีเรียไอโซเลท TCR 1.3 และ TCM 1.2 ที่ได้จากการศึกษาวิจัยในครั้งนี้นั้น สามารถนำไปผลิตเอนไซม์ไคโตซาเนสเพื่อการผลิตไคโตโอลิโก-แซคคาไรด์ได้

Abstract: Chitooligosaccharide is one kind of carbohydrate being obtained from chitosan or chitin degradation. Preparation of chitosan oligosaccharides by enzymatic methods is a preferable way than using chemical methods. This is because of higher yields and better quality. This application of chito-oligosaccharide is worldwide known in argo and food industry. The purpose of this research is to isolate the bacteria that can produce chitosanase from fermented soybeans (Thua-Nao), study the optimal conditions for enzyme production, and the optimal conditions for enzyme activity. The results showed that 2 isolates, TCR 1.3 and TCM 1.2, showed the highest activity of enzyme 0.302 U/ml and 0.265 U/ml, respectively. Microscopic morphological observation of this bacterial isolate TCR 1.3 and TCM 1.2 was exhibited Gram-positive and rod-shaped. Also, colonial appearance was shown circular, undulate, and convex. It is expected that the bacteria may be in the group of Bacillus spp. The optimized conditions of chitosanase production of this isolate TCR 1.3 and TCM 1.2 were chitosan 1.5% (w/v), yeast extract 1.5% (w/v), and pH 6.0. The optimum conditions for chitosanase activity were acid-base pH 5.0–6.0, with the highest activity of 1.11 U/ml both in isolate TCR 1.3 and TCM 1.2. The stability of the acid-base was pH 4.0–7.0. The optimum temperature for the enzyme activity was 50–60 degrees Celsius. The highest enzyme activity was 1.02 U/ml both in isolate TCR 1.3 and TCM 1.2. The stability of the temperature was 0–30 degrees Celsius. Henceforth, the isolates TCR 1.3 and TCM 1.2 obtained from this study can be used to produce chitosanase enzymes for the production of chitooligosaccharide.

มหาวิทยาลัยแม่โจ้. สำนักหอสมุด

Address: เชียงใหม่

Email: mjudc@mju.ac.th

Name: มงคล ถิรบุญยานนท์

Role: อาจารย์ที่ปรึกษาหลัก

Name: วิจิตรา แดงปรก

Role: อาจารย์ที่ปรึกษาร่วม

Name: จุฑามาศ มณีวงศ์

Role: อาจารย์ที่ปรึกษาร่วม

Created: 2018

Modified: 2568-10-11

Issued: 2568-06-06

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

Th

tha

DegreeName: Master of Science in Biotechnology

Level: Master's Degree

Descipline: Master of Science in Biotechnology

Grantor: Maejo University

©copyrights มหาวิทยาลัยแม่โจ้

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	fulltext.pdf.pdf	17.15 MB

ใช้เวลา

0.040914 วินาที