Abstract:
การศึกษาในครั้งนี้มีวัตถุประสงค์ เพื่อศึกษาฤทธิ์ในการยับยั้งเชื้อแบคทีเรีย Propionibacterium acnes ที่ก่อให้เกิดโรคสิว จากสารสกัดจากสาหร่ายทะเลทั้งหมด 23 ตัวอย่าง โดยคัดเลือกสารสกัดของสาหร่ายทะเลที่มีฤทธิ์และศักยภาพในการยับยั้งเชื้อ P. acnes ได้ดีที่สุดเพียง 1 ตัวอย่าง เพื่อการนำไปทำให้มีความบริสุทธิ์มากยิ่งขึ้นโดยใช้วิธีคอลัมน์โครมาโทรกราฟี ด้วยตัวทำละลายที่มีความมีขั้วแตกต่างกัน และประเมินศักยภาพของสารสกัดส่วนย่อยแต่ละส่วนโดยการศึกษาปริมาณสารสกัด ปริมาณโพลีฟีนอล ความสามารถในการยับยั้งเชื้อ P. acnes การวิเคราะห์กลุ่มและชนิดของสารออกฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรีย จากผลการศึกษาพบว่า สาหร่ายทะเลที่มีปริมาณสารสกัดหยาบสูงสุด 3 อันดับคือ Padina minor (PM2) (55.17 ± 1.15 % dw), Lobophora sp. (51.40 ± 0.76 % dw) และ P. minor (PM1) (38.47 ± 1.53 % dw) ตามลำดับ และสารสกัดหยาบของสาหร่ายทะเลที่มีปริมาณโพลีฟีนอลสูงสุด 3 อันดับ คือ Lobophora sp. (62.40 ± 0.32 mg PGE/g dw), P. minor (PM1) (43.27 ± 0.33 mg PGE/g dw) และ P. australis (PA) (24.97 ± 0.65 mg PGE/g dw) ทั้งนี้เมื่อนำไปทดสอบฤทธิ์ยับยั้งเชื้อ P. acnes ด้วยวิธี disc diffusion พบว่ามีสารสกัดหยาบของสาหร่ายทะเลเพียง 9 ตัวอย่างที่มีฤทธิ์ยับยั้งเชื้อ P. acnes และเมื่อทดสอบหาความเข้มข้นต่ำสุดที่ทำให้เชื้อตาย (MBC) พบว่ามีสารสกัดหยาบของสาหร่ายทะเลเพียง 5 ตัวอย่างที่มีฤทธิ์ในยับยั้งเชื้อแบคทีเรีย โดยสารสกัดหยาบของ Lobophora sp. มีค่า MBC ต่ำสุด โดยมีค่าเท่ากับ 8.33 mg/mL
ดังนั้นจึงเลือกนำสารสกัดหยาบของ Lobophora sp. ไปทำให้มีความบริสุทธิ์ยิ่งขึ้นด้วยวิธีคอลัมน์โครมาโทรกราฟี โดยการใช้ตัวทำละลายที่มีขั้วแตกต่างกัน 7 ชนิด ได้แก่ เฮกเซน คลอโรฟอร์ม ไดคลอโรมีเทน เอทิลอะซีเตท อะซีโตน เมทานอล และน้ำ ตามลำดับ ผลการแยกส่วนพบว่า ส่วนสกัดย่อยเอทิลอะซิเตทมีปริมาณสารสูงสุด (31.02 ± 1.55 % ของสารสกัดหยาบ) ขณะที่ส่วนสกัดย่อยอะซิโตนมีปริมาณโพลีฟีนอลสูงสุดเท่ากับ 134.47 ± 0.12 mg/g extract นอกจากนี้ เมื่อนำไปทดสอบฤทธิ์ยับยั้งเชื้อ P. acnes พบว่าส่วนสกัดย่อยอะซิโตน และ เมทานอล มีฤทธิ์ยับยั้งเชื้อ P. acnes ได้ดีที่สุด โดยมีค่า MBC ต่ำสุด เท่ากันเท่ากับ 3.33 mg/mL และเมื่อนำสารสกัดหยาบ และส่วนสกัดย่อยส่วนต่างๆ ของสาหร่าย Lobophora sp. ไปวิเคราะห์หาองค์ประกอบทางเคมีด้วยวิธี Thin Layer Chromatography พบว่ามีสารกลุ่มแอนโทรนในส่วนสกัดย่อยอะซิโตน และเมทานอลเท่านั้น ซึ่งไม่พบในส่วนสกัดย่อยอื่นๆ นอกจากนี้เมื่อนำไปวิเคราะห์สารฟิวโคแซนทินด้วยเครื่อง HPLC พบว่าส่วนสกัดย่อยอะซิโตน มีปริมาณฟิวโคแซนทินสูงสุดโดยมีค่าเท่ากับ 391.79±3.26 mg/g extract ดังนั้นจากการศึกษาครั้งนี้แสดงให้เห็นว่ากลุ่มสารแอนโทรน และสารฟิวโคแซนทินเป็นสารที่มีความสัมพันธ์เชิงบวกกับความสามารถในการยับยั้งเชื้อ P. acnes ดังนั้นส่วนสกัดย่อยอะซิโตนจ ากสาหร่าย Lobophora sp. จึงเป็นสารสกัดที่มีศักยภาพสำหรับการนำไปใช้ยับยั้งเชื้อ P. acnes หรือผลิตภัณฑ์รักษาโรคสิวต่อไป
This study was aim to investigated antibacterial activity of seaweed extract against acne-inducing bacterial (Propionibacterial acnes). Among with 23 marine seaweed crude extracts the best species was selected by the highest potential and antibacterial activity against P. acnes. The best crude extract was purified by column chromatography with different polarity solvent. Moreover, their fractions and polyphenol yield and were investigated, Chemical compositions and anti-bacterial activity against P. acnes were analyzed for selected the best fraction. The result found that the best 3 species with contain the highest yield were Padina minor (PM2) (55.17 ± 1.15 % dw), Lobophora sp. (51.40 ± 0.76 % dw) and P. minor (PM1) (38.47 ± 1.53 % dw), respectively. Moreover, the best 3 highest polyphenol were found in Lobophora sp. (62.40 ± 0.32 mg PGE/g dw), P. minor (PM1) (43.27 ± 0.33 mg PGE/g dw) and P. australis (PA) (24.97 ± 0.65 mg PGE/g dw). However, there are only 9 species and 5 species had activity against P. acnes by disc diffusion technique and the lowest minimal bactericidal concentration (MBC) method, respectively. The best species was found in Lobophora sp. (8.33 mg/mL). Therefore, Lobophora sp. was selected to purified by column chromatography with solvent (hexane, chloroform, dichloromethane, ethyl acetate, acetone, methanol and water respectively).
The result found that ethyl acetate fraction was show the highest yield with 31.02 ± 1.55 % of crude extract. Whereas, the highest polyphenol contain was found in acetone fraction with 131.47 ± 0.12 mg / g extract. Moreover, the best fraction against P. acnes was found in acetone and methanol fraction with 3.33 mg/mL. Moreover, crude extract and fraction were analyzed their composition by TLC technique. The result found that acetone and methanol fraction were found anthrone group only. Moreover, fucoxanthin was investigated by HPLC. The highest fucoxanthin were found in acetone fraction with 391.79±3.26 mg/g extract Therefore, these results may suggest that fucoxanthin had a positive relation with potential against P. acnes. Especially, acetone fraction of Lobophora sp. had potential against P. acnes or used as acne care products