การผลิตและการศึกษาคุณสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มีความจำเพาะต่อ Campylobacter jejuni

Production and characterization of monoclonal antibody specific to Campylobacter jejuni

Name: วรกนก กนกลดารมย์

ThaSH: มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ -- วิทยานิพนธ์. วท.ม. (จุลชีววิทยา) 2559.

Classification :.LCCS: QR186.85

ThaSH: มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์. -- สาขาจุลชีววิทยา -- วิทยานิพนธ์

ThaSH: โมโนโคลนอลแอนติบอดีย์ -- การผลิต

ThaSH: แคมพัยโลแบคเตอร์เจจูไน

Abstract: งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อผลิต และศึกษาคุณสมบัติโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มีความจำเพาะต่อ Campylobacter jejuni โดยการฉีดกระตุ้นหนูBALB/c ด้วยเชื้อ Campylobacter jejuni ATCC 33291 และ Campylobacter jejuni KGA12-7(1) ที่คัดแยกมาจากโรงงานแปรรูป ผลิตภัณฑ์ไก่ในประเทศไทย จำนวน 3 ครั้งห่างกันครั้งละ 2 สัปดาห์จากนั้นนำเซลล์ม้ามของหนูมาหลอมรวมกับเซลล์มัยอิโลมา Sp2/0 คัดเลือกเซลล์ไฮบริโดมาที่สร้างแอนติบอดีที่จำเพาะต่อ Campylobacter jejuni ATCC 33291 และ Campylobacter jejuni KGA12-7(1) ด้วยเทคนิค Indirect ELISA ได้เซลล์ไฮบริโดมาทั้งสิ้น 54 โคลนจากเซลล์ม้ามหนูที่ฉีดกระตุ้นด้วย Campylobacter jejuni ATCC 33921 โดยพบเซลล์ไฮบริโดมาจำนวน 3 โคลนคือ 3C5, 2A4 และ4D2 ที่มี ความจำเพาะสูงมีค่า Optical density เท่ากับ 1.707, 1.613 และ1.646 ตามลำดับ ซึ่งสอดคล้องต่อผล Dot ELISA ที่ทั้ง 3 รหัสมีความจำเพาะต่อ Campylobacter jejuni ATCC 33291 มากที่สุด ผลทดสอบความไวโดยการใช้เทคนิค ELISA พบว่า โมโนโคลนอลแอนติบอดีรหัส 3C5 มีค่า Antibody titer มากกว่า 1 :1024 และสามารถตรวจหา Campylobacter jejuni ATCC 33291 ได้ในปริมาณโปรตีนที่ 22 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร และผลทดสอบด้วยเทคนิค Western Blot พบว่าโมโนโคลนอลแอนติบอดี 3C5 สามารถจับกับโปรตีนของ Campylobacter jejuni ATCC 33291 ที่มี น้ำหนักโมเลกุลประมาณ 10 - 17 kDa, 46-70 kDa และ80 - 175 kDa โดยไม่ทำปฏิกิริยาต่อแบคทีเรียชนิดอื่นที่ใช้ทดสอบคือ Campylobacter jejuni KGA12-7(1), Campylobacter coli NCTC 11353, Salmonella Typhi DMST 5784, Escherichia coli ATCC 33218 และ Vibrio cholera แสดงว่าโนโคลนอลแอนติบอดีรหัส 3C5 มีความจำเพาะสูงต่อ Campylobacter jejuni This study aims to produce and characterization of monoclonal antibody (mAb) specific to Campylobacter jejuni. BALB/c mice were immunized with whole cells Campylobacter jejuni ATCC 33291 and Campylobacter jejuni KGA12-7(1) isolated from a factory. Injections were delivered on days 0, 14 and 28. Splenocytes were isolated from the immunized mice and fused with myeloma cells (Sp2/0). Indirect ELISA was used for primary selections step of hybridomas and it was found that 3C5, 2A4 and 4D2 hybridomas clones had high specificity and sensitivity to Campylobacter jejuni ATCC 33291 with optical densities (O.D.) 450 nanometer of 1.707, 1.613 and 1.646, respectively. Dot ELISA results also indicated that 3C5, 2A4 and 4D2 had high specificity to Campylobacter jejuni ATCC 33291. Indirect ELISA revealed that 3C5 had the highest sensitivity for the detection of Campylobacter jejuni ATCC 33291 protein with 22 ng/ml and antibody titer at 1:1024. Western blot results indicated that 3C5 mAb bound to Campylobacter jejuni ATCC33921 protein molecular weights (Mw) 10-17 kDa, 46-70 kDa and 80-175 kDa. The 3C5 mAb also showed high specificity to Campylobacter jejuni and did bind to neither Campylobacter jejuni KGA12-7 (1), Campylobacter coli NCTC 11353, Salmonella Typhi DMST 5784, Escherichia coli ATCC 33218 nor Vibrio cholera.

มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์. สำนักหอสมุด

Address: กรุงเทพมหานคร

Email: tdckulib@ku.ac.th

Name: ฆรณี ตุ้ยเต็มวงศ์

Role: อาจารย์ที่ปรึกษาวิทยานิพนธ์หลัก

Name: ประเวทย์ ตุ้ยเต็มวงศ์

Role: อาจารย์ที่ปรึกษาวิทยานิพนธ์ร่วม

Name: ชัยวัฒน์ กิตติกูล

Role: อาจารย์ที่ปรึกษาวิทยานิพนธ์ร่วม

Created: 2559

Modified: 2566-05-12

Issued: 2566-05-12

วิทยานิพนธ์/Thesis

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

URL: https://kasetsart.idm.oclc.org/login?url=https://www.lib.ku.ac.th/KUthesis/2559/worakanog-kan-all.pdf

CallNumber: QR186.85 .ว17

tha

DegreeName: วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Level: ปริญญาโท

Descipline: จุลชีววิทยา

Grantor: มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์

©copyrights มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	worakanog-kan-all.pdf	3.6 MB

ใช้เวลา

0.03332 วินาที