การปรับปรุงการเพาะเลี้ยงในอาหารที่มีแป้งเป็นองค์ประกอบของเชื้อแอคติโนมัยซีทจากดินนาเกลือเพื่อหาสารที่มีฤทธิ์ยับยั้งทางชีวภาพ : รายงานการวิจัยฉบับสมบูรณ์

Cultivation in starch hydrolysis medium of actinomycetes from salt field and their antimicrobial activity

Name: คนึงกานต์ กลั่นบุศย์

Email : khanungkan.kl@kmitl.ac.th

Name: จิตติ ท่าไว

Email : chitti.th@kmitl.ac.th

ThaSH: แอคติโนมัยซิส -- วิจัย

ThaSH: นาเกลือ -- วิจัย

ThaSH: สารออกฤทธิ์ทางชีวภาพ -- วิจัย

Abstract: เชื้อแอคติโนมัยซีทจานวนทั้งหมด 41 ไอโซเลท ที่คัดแยกได้จากดินนาเกลือ ตาบลบ้านแหลม จังหวัดเพชรบุรี ด้วยอาหาร starch casein agar (SCA) ที่มีการเติมเกลือโซเดียมคลอไรด์ร้อยละ 0.46 สามารถจัดกลุ่มเชื้อแอคติโนมัยซีทได้ 5 กลุ่ม โดยอาศัยลักษณะทางสัณฐานวิทยาและการเจริญของเชื้อแอคติโนมัยซีทเป็นเกณฑ์ แล้วนาไอโซเลททั้งหมดมาทดสอบความสามารถในการเจริญบนอาหาร starch casein agar (SCA) ที่มีความเข้มข้นของเกลือโซเดียมคลอไรด์ร้อยละ 0.46, 3, 5, 7, 9, 12 และ 15 พบว่าเชื้อแอคติโนมัยซีทโดยส่วนใหญ่เจริญได้ดีที่ความเข้มข้นของเกลือร้อยละ 0.46, 3, 5 และ 7 มีเพียง 9 ไอโซเลทที่สามารถเจริญที่ความเข้มข้นของเกลือที่ร้อยละ 9 เชื้อแอคติโนมัยซีทไอโซเลทที่ MDB 925 มีความสามารถในการย่อยสลายแป้งได้ดีที่สุดโดยมีขนาดเคลียร์โซนกว้างที่สุด เฉลี่ยเท่ากับ 22.14 มิลลิเมตร เมื่อนามาเลี้ยงในอาหารเหลว ISP2 พบว่าเมื่อหาค่าอัตราการเจริญจาเพาะ (μ) สามารถเจริญได้ดีที่สุดในอาหารที่มีค่าความเป็นกรดด่าง (pH) เท่ากับ 8 ในอาหารเหลว ISP2 ที่มีความเข้มข้นของเกลือโซเดียมคลอไรด์ร้อยละ 4 และเจริญได้ดีที่สุดที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสตามลาดับ จากเชื้อแอคติโนมัยซีท 14 ไอโซเลทไม่พบการสร้างเอนไซม์ L-asparaginase ด้วยอาหาร Modified M-9 ผสม phenol red ร้อยละ 0.009 จากนั้นนาเชื้อแอคติโนมัยซีทมาทาการทดสอบฤทธิ์ยับยั้งทางชีวภาพโดยวิธีการทดสอบขั้นต้น (pre-test) พบว่า 9 ไอโซเลทสามารถยับยั้งการเจริญของเชื้อจุลินทรีย์ทดสอบทั้ง 7 สายพันธุ์ได้ ซึ่งได้แก่ Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus TISTR 118, Micrococcus luteus TIRTR 2374 และ Candida albicans ATCC 90028 แต่ไม่พบการยับยั้งการเจริญของเชื้อจุลินทรีย์ทดสอบทั้ง 7 สายพันธุ์ได้บนเทคนิค agar disc diffusion การศึกษาการวิเคราะห์ลาดับเบสบนสายดีเอ็นเอในช่วง 16S rRNA gene และการวิเคราะห์สายวิวัฒนาการ (Phylogenetic analysis) พบว่าเชื้อแคติโนมัยซีท 7 ไอโซเลทที่มีลักษณะทางสัณฐานวิทยาที่น่าสนใจ ได้แก่ MDB1929 มีความใกล้เคียงกับ Streptomyces diastaticus subsp. Ardesiacus 99.72%, MDB30310 มีความใกล้เคียงกับ Streptomyces diastaticus subsp. Ardesiacus 99.69%, MDB40310 มีความใกล้เคียงกับ Streptomyces luteus 99.79%, MDB3222 มีความใกล้เคียงกับ Streptomyces diastaticus subsp. Ardesiacus 99.71%, MDB1228 มีความใกล้เคียงกับ Streptomyces rochei 100.00%, MDB822 มีความใกล้เคียงกับ Streptomyces rochei 100.00% และ MDB2029 มีความใกล้เคียงกับ Streptomyces tendae 99.86% นอกจากนี้ไอโซเลทที่ MDB40310, MDB822 และ MDB2029 สามารถทนเกลือได้ที่ร้อยละ 9 อีกด้วย จึงสามารถจัดเป็นเชื้อที่สามารถทนเกลือปานกลางอีกด้วย

Abstract: A total of 41 actinomycetes were isolated from salt field soil of Ban laem, Petchaburi using Starch casein agar (SCA) with 0.46% (w/v) NaCl. And they could be grouped into 5 groups based on morphological characteristics and cultured characterristics. The ability of NaCl utilization were examined by using SCA media supplemented with NaCl concentration along the gradients of 0.46, 3, 5, 7, 9, 12 and 15 % (w/v) and found that almost of all isolates grown best between 0.46-7% and only 9 isolates could be grown at 9%. According to starch hydrolysis activity, isolate MDB925 gave the highest clear zone on ISP4 agar at 22.14 mm and had specific growth rate (μ) the best at pH 8, 4% NaCl and 37oC when culture in ISP2 broth. The activity of L-asparaginase on Modified M-9 with 0.009% phenol red of 14 isolates could not found. Furthermore, antimicrobial activity by Pre-test method found the inhibition zone of 9 isolates against Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus TISTR 118, Micrococcus luteus TIRTR 2374 and Candida albicans ATCC 90028 but the crude extractions and intracellular extractions were tested by agar disc diffusion method, the results showed that both of the extractions could not detect the inhibition zone. The 16S rRNA gene sequence analyses indicated that 7 isolates which have interested morphological characterization; MDB1929 showing similarity with Streptomyces diastaticus subsp. Ardesiacus 99.72%, MDB30310 showing similarity with Streptomyces diastaticus subsp. Ardesiacus 99.69%, MDB40310 showing similarity with Streptomyces luteus 99.79%, MDB3222 showing similarity with Streptomyces diastaticus subsp. Ardesiacus 99.71%, MDB1228 showing similarity with Streptomyces rochei 100.00%, MDB822 showing similarity with Streptomyces rochei 100.00% และ MDB2029 showing similarity with Streptomyces tendae 99.86%. Furthermore, MDB40310, MDB822 and MDB2029 could grow on 9% NaCl concentration which could classify to be moderate halotolerance.

สถาบันเทคโนโลยีพระจอมเกล้าเจ้าคุณทหารลาดกระบัง. สำนักหอสมุดกลาง

Address: กรุงเทพมหานคร

Email: Lifelong@kmitl.ac.th

Name: สถาบันเทคโนโลยีพระจอมเกล้าเจ้าคุณทหารลาดกระบัง. คณะวิทยาศาสตร์

Role: ผู้ให้ทุน

Created: 2560

Modified: 2565-01-11

Issued: 2565-01-11

งานวิจัย/Research report

application/pdf

tha

©copyrights สถาบันเทคโนโลยีพระจอมเกล้าเจ้าคุณทหารลาดกระบัง

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	RC00344.pdf	6.53 MB	1	2022-01-12 13:40:44

ใช้เวลา

-0.968172 วินาที