Purification and characterization of xylanase from endophytic fungus Alternaria alternata isolate PTRa9

การทำให้บริสุทธิ์และลักษณะสมบัติของไซลาเนสจากราเอนโดไฟต์ Alternaria alternata ไอโซเลต PTRa9

Name: Nichawee Wipusaree

LCSH: Xylanase

LCSH: Endophytic fungi

Abstract: Microorganisms were the major sources of xylanase production due to there were important in agriculture and industrial. The aim of this research was to study the xylanase production from endophytic fungi. Totally 54 endophytes isolated from Corton oblongifolius Roxb., Palm and mangrove leaves were tested for xylanase activity. There were only 31 endophytes isolated produce clear zone around colony in selective xylan agar medium which indicated xylanase-producing in primary screening. Endophyte isolate PTRa9 yield the highest xylanase-production in secondary screening. The optimal conditions that PTRa9 produced highest xylanase activity when 2% rice bran and 0.1% (NH₄)₂SO₄ as carbon and grew in the medium supplemented with nitrogen source, respectively for 4 days. Xylanase purification was done by ammonium sulfate precipitation, ion exchange chromatography and gel filtration chromatography which resulted in an apparent increase in specific activity as 161.1 U/mg protein and 60.8 times of purity. Xylanase characterization includes thermal stability, pH stability, metal ions, kinetic analysis and molecular weight were studied and the result showed that at 40°C for 20 min, at pH range 3 to 11 for 60 min had relative xylanase activity of 131.27 and higher than 100 %, respectively. PTRa9 xylanase was strongly inhibited by Hg²⁺, and was moderately inhibited by Mg²⁺, Mn²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Fe²⁺ and EDTA. For kinetic analysis, it had Km of 2.369 mg/ml and Vmax of 2.142 µl/min/mg protein. Molecular weight of Xylanase of PTRa9 was of 54.8 kDa.

Abstract: จุลินทรีย์เป็นแหล่งสร้างไซลาเนสที่สำคัญ และมีความสำคัญทางการเกษตรและอุตสาหกรรม ในงานวิจัยนี้ได้มุ่งเน้นการศึกษาไซลาเนสสร้างโดยราเอนโดไฟต์ ทดสอบราเอนโดไฟต์จำนวน 54 ไอโซเลต ที่แยกราเอนโดไฟต์จากใบพืชเปล้าใหญ่ ปาล์ม และไม้โกงกาง พบว่ามีราเพียง 31 ไอโซเลตที่สร้างบริเวณใสรอบโคโลนีที่เจริญบนอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีไซแลนเป็นองค์ประกอบ ซึ่งแสดงความสามารถสร้างไซลาเนสได้ ในการคัดเลือกขั้นปฐมภูมิ และตรวจพบว่าราไอโซเลต PTRa9 มีค่ากิจกรรมของไซลาเนสสูงสุดในการคัดเลือกขั้นทุติยภูมิ สภาวะที่ราเอนโดไฟต์ PTRa9 มีกิจกรรมไซลาเนสสูงสุดเมื่อใช้รำข้าวที่ความเข้มข้น 2 เปอร์เซ็นต์เป็นแหล่งคาร์บอน แอมโมเนียมซัลเฟตที่ความเข้มข้น 0.1 เปอร์เซ็นต์เป็นแหล่งไนโตรเจน บ่มที่ระยะเวลา 4 วัน ทำไซลาเนสให้บริสุทธิ์ประกอบด้วยการตกตะกอนโปรตีนด้วยเกลือแอมโมเนียมซัลเฟต โครมาโทกราฟีแบบแลกเปลี่ยนประจุ และโครมาโทกราฟีแบบแยกตามขนาดโมเลกุล พบว่ามีค่ากิจกรรมแบบจำเพาะเพิ่มสูงขึ้นถึง 161.1 ยูนิต/มิลลิกรัม โปรตีน มีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 60.8 เท่า ความเสถียรที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาที ที่ช่วงค่าความเป็นกรดด่างตั้งแต่ 3 ถึง 11 เป็นระยะเวลา 60 นาที ให้กิจกรรมไซลาเนสโดยเทียบเคียงมีค่าเท่ากับ 131.27 เปอร์เซ็นต์และมากกว่า 100 เปอร์เซ็นต์ของชุดควบคุมตามลำดับ ปรอทมีฤทธิ์ยับยั้งการทำงานของไซลาเนสได้สูง ขณะที่แมกนีเซียม แมงกานีส คอปเปอร์ สังกะสี เหล็ก และ อีดีทีเอ ยับยั้งการทำงานของไซลาเนสได้ปานกลาง ค่า Km มีค่าเท่ากับ 2.369 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร และ Vmax มีค่าเท่ากับ 2.142 ไมโครโมล/นาที/มิลลิกรัมโปรตีน ไซลาเนสบริสุทธิ์ของราเอนโดไฟต์ไอโซเลต PTRa9 มีน้ำหนักโมเลกุลเท่ากับ 54.8 กิโลดาลตัน

Chulalongkorn University. Office of Academic Resources

Address: BANGKOK

Email: cuir@car.chula.ac.th

Name: Apichart Karnchanatat

Role: Advisor

Name: Prakitsin Sihanonth

Role: Advisor

Name: Jittra Piapukiew

Role: Advisor

Created: 2010

Modified: 2021-07-08

Issued: 2021-07-08

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

URL: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/61899

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Biotechnology

Grantor: Chulalongkorn University

©copyrights Chulalongkorn University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	5172288823_2010.pdf	970.3 KB

ใช้เวลา

0.022738 วินาที