Detection and typing of human papillomavirus in cervical intraepithelial neoplasia (CIN) grade III by PCR and Dot Hybridization

การตรวจหาชนิดของ HUMAN Papillomavirus ใน cervical intraepithelial neoplasia (CIN) ระยะที่ III โดยปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส และ ดอท ไฮบริไดเซชัน

Name: Monthon Lertworapreecha

LCSH: Papillomavirus diseases

LCSH: Papillomaviruses

LCSH: Cervix uteri -- Cancer

LCSH: Cervix uteri -- Cancer -- Pathogenesis

Abstract: Genital human papillomavirus (HPV) is one of the most important causative agent in cervical cancer which is developed from precancerous lesion know as cervical intraepithelial neoplasia (CIN-I, CIN-II, and CIN-III). To date over 77 different HPV-types have been identified. More than 35 types are involved in anogenital diseases and 20 types or more are associated with CIN and cervical malignancy. In this study, the prevalence of HPV-infection in CIN-III and distribution of HPV-types were investigated A hundred tissue samples diagnosed as CIN-III and 100 tissues from chronic cervicitis (with a normal histologic appearance) selected as a control group were used. All specimens were formalin-fixed and paraffin embedded tissues. The extracted DNA were prepared and screened for HPV by polymerase chain reaction (PCR) using L1 consensus primers. All amplified products were analyzed by gel electrophoresis (GE) and dot hybridization (DH) using generic probe (GP), and type-specific probe (TS) specific for HPV-6,11,16,18, and 33 (TS-6, TS-11, TS-16, TS-18, and TS-33). HPV-DNA was detected in 72 % (72/100) of CIN-III 6% (6/100) of the control group, giving a crude odd ratio of 40.28 (95% CI= 19.23-84.35). Among the CIN-III group, the most prevalent was HPV-16 ; 48.61% (35/72) followed by HPV-18 ; 15.27 (11/72), HPV-6 and 33 were detected in equal percentage 5.56% (4/72) and HPV-11 was found 2.7% (2/72). Mixed infection was identified in 10 specimens i.e., HPV-6/16, HPV-16/18, HPV-16/33, and HPV-16/18/33. Twelve samples (37.5) were untyped. Our results support the hypothesis that certain HPV-types especially HPV-16 and 18 are greatly involved in the development of CIN and cervical cancer.

Abstract: Genital human papillomavirus (HPV) มีบทบาทสำคัญทำให้เกิดมะเร็งปากมดลูก โดยมีการพัฒนามาจากระยะก่อนมะเร็งที่เรียกว่า cervical intraepithelial neoplasia (CIN) ซึ่งแบ่งออกเป็น 3ระยะคือCIN-I, CIN-II, และ CIN-III ในปัจจุบันนี้สามารถจำแนก HPV ได้มากกว่า 70 types และประมาณ 35 types มีความเกี่ยวข้องกับการก่อโรคที่บริเวณอวัยวะสืบพันธุ์ (anogenital tract) ในจำนวนนี้โดยประมาณ 20 types หรือมากกว่าพบว่ามีความสัมพันธ์กับการเกิด CIN และมะเร็งปากมดลูก (cervical cancer) ในการศึกษานี้เป็นการศึกษาถึงความชุกของการติดเชื้อ HPV และการแพร่กระจายของเชื้อ HPV-type ต่างๆในผู้ป่วย CIN ระยะที่ III จำนวน 100 ตัวอย่าง เปรียบเทียบกับผู้ป่วย chronic cervicitis เป็นตัวอย่างควบคุม จำนวน 100 ตัวอย่าง เนื้อเยื่อจากตัวอย่างทั้งหมดถูกตรึงด้วยฟอร์มาลินและฝังเก็บในพาราฟิน (formalin-fixed paraffin embedded tissue) และตรวจหา เชื้อ HPV โดยวิธี PCR ด้วย L1 consensus primers ตัวอย่างที่ผ่านขบวนการ PCR แล้วนำมาทำการวิเคราะห์ ด้วยวิธี gel electrophoresis (GE) และ dot hybridization (DH) โดยใช้ตัวตรวจจับทั่วไป (generic probe ; GP), และ ตัวตรวจจับแบบจำเพาะ (type-specific probes ; TS) ต่อ HPV-6, 11,16,18 และ 33 (TS-6, TS-11, TS-16, TS-18 และ TS-33) ผลการศึกษาในตัวอย่าง CIN-III สามารถตรวจพบ HPV-DNA 72 ตัวอย่าง คิดเป็นร้อยละ 72 และในกลุ่มควบคุมตรวจพบเพียง 6 ตัวอย่างคิดเป็นร้อยละ 6 ผู้ป่วย CIN-III มีโอกาสตรวจพบเชื้อ HPV มากกว่ากลุ่มควบคุมถึง 40.28 เท่าโดยมีนัยสำคัญทางสถิติ (95% CI = 19.23-84.35) ในตัวอย่างกลุ่ม CIN-III พบว่าส่วนใหญ่เป็น HPV-16 คิดเป็นร้อยละ 48.61 (35/72) รองลงมาคือ HPV-18 พบเป็นร้อยละ 15.27 (4/72), HPV-6 และ HPV-33 พบจำนวนเท่ากันคือ 4 จาก 72 ตัวอย่าง คิดเป็นร้อยละ 5.56 และ HPV-11 พบร้อยละ 2.7 (2/72) นอกจากนี้มี 10 ตัวอย่างที่มีการติดเชื้อร่วมกันมากกว่า 1 type ได้แก่ HPV-6/16, HPV-16/18, HPV-16/33 และ HPV-16/18/33 ที่เหลือ 27 ตัวอย่างคิดเป็นร้อยละ 37.5 ไม่สามารถทำการจำแนก type ได้ ในตัวอย่างกลุ่มควบคุมตรวจพบ HPV-6 ร้อยละ 33.3 (2/6) และ HPV-18 ร้อยละ 16.6 (1/6) อีก 3 ตัวอย่างไม่สามารถทำการจำแนก type ได้ ผลการวิจัยครั้งนี้สนับสนุนสมมุติฐานที่ว่า HPV บาง type โดยเฉพาะ HPV-16 และ18 มีความเกี่ยวข้องอย่างมากกับการเกิด CIN และมะเร็งปากมดลูก

Chulalongkorn University. Office of Academic Resources

Address: BANGKOK

Email: cuir@car.chula.ac.th

Name: Parvapan Bhattarakosol

Role: advisor

Name: Somchai Niruthisard

Role: co-advisor

Created: 1997

Modified: 2021-07-07

Issued: 2021-07-07

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

URL: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/55793

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Medical Microbiology

Grantor: Chulalongkorn University

©copyrights Chulalongkorn University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	Monthon_le_TDC.pdf	5.4 MB

ใช้เวลา

0.019396 วินาที