Large Scale Production of Anti - Chicken coccidia IgY

การผลิตอิมมูโนโกลบูลิน Y ที่ต้านเชื้อบิดในไก่ในระดับกึ่งอุตสาหกรรม

Name: Thanasit Intanorat

Name: ธนาสิทธิ์ อินทะโนรัตน์

keyword: Anti-chicken coccidia IgY

Abstract: Chicken coccidiosis is an intestinal infectious disease caused by the Eimeria protozoan parasite. This disease causes impaired growth rate in broilers and reduces egg production in laying hens, resulting in annual economic losses to the world's poultry industry. Due to increasing concerns with prophylactic drug use, the appearance of Eimeria drug resistance and high costs of vaccines, alternative control methods need to be developed. Oral administration of specific egg yolk antibodies (IgY) has been proven to successfully treat coccidiosis in chickens (Lee et al., 2009). The aims of this study are, therefore, to study large scale production of anti-chicken coccidia IgY for animal feed supplement purpose. In this study, anti-chicken coccidia IgY was produced in 855 six month old Hisex hens. Antigen that consists of various sporulated Eimeria spp. was used for immunization of these hens. Anti-chicken coccidia IgY in immunized hen egg yolk was detected at week 6 after first immunization. Immunofluoresence assay showed that the IgY produced specifically bind to coccidia cells at sporulated stage. The majority of the immunized hens (76%) produced a moderate level of the anti-chicken coccidia IgY and 14 % of the hens produced a high level of IgY, while 10% of the hens was found not producing the anti-chicken coccidia IgY. The anti-chicken coccidia IgY production period of immnunized hens was determined at approximately 14 weeks, from week 6 to week 19 after the first immunization. The IgY was planned to be used as dried powder. For preparing dried IgY product, spray drying method with an air inlet temperature of 140 C and an air outlet temperature of noc was choosen to dry homogenized egg yolk, which was weekly collected from immunized hens. It was found that this spray drying condition did not affect IgY activities when tested by indirect ELISA. There were some pathogenic bacteria detected in the sample due to egg shell contamination. However, those pathogenic bacteria were significantly reduced after spray drying process. Thus, sterilization of egg shells should be considered in order to avoid the contamination altogether. The dried anti-chicken coccidia IgY product was stored at 4 C and 30 C, and retained its activities for around 16 and 12 months, respectively. Because of its stability at 30 C, this dried IgY powder is ideal for use in chicken feed. Not only as a supplement in the animal dried feed, the dried IgY powder was also tested as a supplement in drinking water. It was revealed by sedimentation analysis that the dried IgY particles remained in water suspension for 1 hour and 2 hours when 0.1% and 0.3% Tween 80 were added, respectively. In summary, strategies for large scale production of anti-chicken coccidia IgY were revealed in this study. The anti-chicken coccidia IgY was found specific to the parasite and dried IgY product is suitable to be used in both chicken feed and drinking water.

Abstract: รคบิดไก่เป็นโรคติดเชื้อในลำไล้ซึ่มีสาเหตุมาจากเชื้อปรสิตจำพวกโปรโตซัวในตระกูล Eimeria โรคดังกล่าวเป็นสาเหตุให้มีการลดอัตราการเติบโตของไก่เนื้อ และลดการผลิตไข่ในไก่ไข่ ส่งผลให้มี การสูญเสียทางเศรษฐกิจในอุตสาหกรรมสัตว์ปีกทั่วโลก เนื่องจากมีการเพิ่มขึ้นของความกังวลเกี่ยว กับสารเคมีตกค้างจากการใช้ยารักษา การดื้อยาของเชื้อ Eimeria รวมไปถึงวัคซีนที่มีราคาสูง ทำให้ มีความจำเป็นต้องพัฒนาทางเลือกใหม่สำหรับใช้ในการควบคุมโรค โดยมีรายงานว่าการใช้แอนติบอ ดีในไข่แดง (อิมมูโนโกลบูลิน Y, lgY) ที่จำเพาะต่อเชื้อบิดผสมอาหารสามารถควบคุมโรคบิดไก่ได้ (Lee et al.,2009) วัตถุประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้เพื่อผลิตอิมมูโนโกลบูลิน Y (lgY) ที่ต้านเชื้อบิดไก่ในระดับกึ่ง อุตสาหกรรมและตรวจสอบคุณลักษณะของ lgY ที่ผลิต เพื่อตรวจสอบความเหมาะสมในการนำ ไปใช้เสริมในอาหารสัตว์ lgY ที่จำเพาะต่อเชื้อบิดไก่ในการศึกษาครั้งนี้ถูกผลิตโดยใช้ไก่ไข่สายพันธุ์ Hisex อายุ 6 เดือน จำนวน 855 ตัวและใช้เชื้อบิดไก่ (Eimeria spp.) หลายสายพันธุ์เป็นแอนติเจนใน การฉีดกระตุ้น ผลการศึกษาพบว่า หลังจากการฉีดกระตุ้นครั้งแรก ไตเตอร์ของ lgY ที่ต้านต่อเชื้อบิด ไก่สามารถถูกตรวจพบในไข่แดงของไก่ที่ถูกฉีดกระตุ้นที่ระดับ 2560 ในสัปดาห์ที่หก เมื่อทำการ ทดสอบด้วยเทคนิค Immunofluorescence แสดงให้เห็นว่า lgY ที่ผลิตขึ้นสามารถจับอย่างจำเพาะเจาะ จงกับเชื้อบิดไก่ในระยะสร้างสปอร์ จากการสุ่มตรวจไข่พบว่าไก่ที่ถูกฉีดกระตุ้นให้ผลผลิต lgY ที่ต้านต่อเชื้อบิดไก่ในระดับสูง ปานกลาง และไม่มีการผลิต lgY คิดเป็นร้อยละ 76, 14 และ 10 ตามลำดับ ไก่ที่ถูกฉีดกระตุ้นมีช่วงระยะในการผลิต lgY ที่ต้านต่อเชื้อบิดไก่ จากสัปดาห์ที่ 6 ถึง 19 หลังจากการฉีดกระตุ้นครั้งแรกรวมระยะเวลาประมาณ 14 สัปดาห์ lgY ที่ผลิตได้ถูกนำไปใช้ในการออกแบบให้อยู่ในรูปผลิตภัณฑ์ไข่ผล โดยใช้วิธีการ Spray dry ใน การแปรรูปไข่แดงสดให้เป็น lgY ในรูปผงแห้ง ที่อุณหภูมิขาเข้า 140 องศาเซลเซียส และอุณหภูมิขา ออก 72 องศาเซลเซียสเมื่อทดสอบด้วยเทคนิค indirect ELISA พบว่าสภาวะดังกล่าวไม่ส่งผลกระ ทบต่อกิจกรรมของ lgY ในการจับจำเพาะต่อแอนติเจน จากการตรวจสอบการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ ในไข่แดงพบว่ามีการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ก่อโรค ซึ่งน่าจะปนเปื้อนมากับเปลือกไข่ อย่างไรก็ตาม พบว่าการใช้วิธี spray dry ช่วยทำให้จำนวนของแบคทีเรียก่อโรคลดลงได้บางส่วน เพื่อหลีกเลี่ยง การปนเปื้อนไปยังผลิตภัณฑ์ ในกระบวนการผลิตควรต้องคำนึงถึงการทำให็เปลือกไข่ปลอดเชื้อ เมื่อ ศึกษาอายุการใช้งานของผลิตภัณฑ์ lgY ผงแห้ง พบว่าผลิตภัณฑ์ที่เก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 และ 30 องศา เซลเซียสมีอายุการใช้งานประมาณ 16 และ 12 เดือนตามลำดับ การที่ lgY ผงคงสภาพได้ดีที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส บ่งบอกถึงความสามารถในการนำไปผสมในอาหารสัตว์ ไม่เพียงแต่ความคาดหวัง ที่จะนำไปผสมอาหารแห้งเท่านั้น ผลิตภัณฑ์ lgY ยังได้รับการตรวจสอบการแขวนลอยในน้ำ จากการ ทดสอบพบว่าอนุภาคผลิตภัณฑ์ lgY สามารถคงตัวอยู่ในน้ำได้ 1 ชั่วโมงหรือ 2 ชั่วโมง เมื่อทำการเติม Tween 80 ร้อยละ 0.1 หรือ 0.3 ตามลำดับ การตรวจวัดขนาดอนุภาคของผลิตภัณฑ์ lgY พบว่ามีขนาดเล็กกว่า 200 ไมครอนซึ่งเป็นขนาดที่อยู่ ในช่วงที่เหมาะสมต่อการนำไปใช้แขวนลอยในน้ำดื่ม นอกจากนี้การทดสอบการตกตะกอนของผลิต ภัณฑ์ lgY พบว่าการเติม Tween 80 ที่ความเข้มข้นร้อยละ 0.3 ลงไปในสารแขวนลอยของผลิตภัณฑ์ lgY สามารถยืดระยะเวลาในการการตกตะกอนของผง lgY ได้ประมาณ 2 ชั่วโมง กล่าวโดยสรุป งานวิทยานิพนธ์นี้ได้ทำการศึกษาแนวทางในการผลิต lgY ที่ต้านต่อเชื้อบิดไก่ในระดับ กึ่งอุตสาหกรรม lgY ซึ่งสามารถผลิตผลิตภัณฑ์ lgY ที่ต้องการได้ โดยผลิตภัณฑ์แอนติบอดีนี้มี ความจำเพาะกับเชื้อบิดไก่และสามารถนำไปใช้ผสมได้ทั้งในอาหารแห้งและน้ำดื่ม

King Mongkut's University of Technology Thonburi. KMUTT Library

Address: BANGKOK

Email: info.lib@mail.kmutt.ac.th

Name: Kanokwan Poomputsa

Role: Advisor

Created: 2011

Modified: 2012-06-13

Issued: 2012-05-27

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

CallNumber: BIT644

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Biotechnology

Grantor: King Mongkut's University of Technology Thonburi

©copyrights King Mongkut's University of Technology Thonburi

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	BIT644.pdf	1.81 MB	15	2024-01-17 13:19:52
2	BIT644ab.pdf	57.02 KB	6	2019-06-07 10:06:29

ใช้เวลา

0.050307 วินาที