ผลของสารพวกซัลโฟนาไมด์ต่อไดไฮโดรพเทอโรเอท ซินเทส จาก Escherichia coli

Effect of sulfonamides on dihydropteroate synthase from Escherichia coli

Name: นภาพร สายอุบล

ThaSH: แบคทีเรีย

ThaSH: ซัลโฟนาไมด์

ThaSH: ไดไฮโดรพเทอโรเอทซินทาส

Abstract: งานวิจัยนี้ได้ศึกษาผลการยับยั้งของสารพวกซัลโฟนาไมด์ 5 ชนิด ต่อการทำงานของไดไฮโดรพเทอโรเอท ซินเทส จาก Escherichia coli โดยการหาค่าของความเข้มข้นที่น้อยที่สุดที่ใช้ในการยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย (MIC) ค่าของความเข้มข้นของซัลโฟนาไมด์ที่ใช้ในการยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ได้ 50 เปอร์เซนต์ (I50) และค่าคงที่ของการยับยั้ง (Ki) พบว่าค่าของ MIC ของ sulfanilamide ในอาหารเลี้ยงเชื้อแอลบี-บรอท เท่ากับ 4.30x10-2 โมล/ลิตร และในอาหารเลี้ยงเชื้อสูตรปรับต่ำกลูโคสค่า MIC ของ sulfanilamide และ p-aminobenzenesulfonamido-propyl bromide เท่ากับ 1.31x10-3 โมล/ลิตร และ 2.91x10-3 โมล/ลิตร ตามลำดับ จากการศึกษาค่า I50 ของซัลโฟนาไมด์ที่มีต่อ enzyme ที่ได้จากการตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตอิ่มตัว 20-60% พบว่าค่า I50 ของ sulfanilamide, N,N'-bis(sulfanilyl)-L-cystine, p-aminobenzenesulfonamidopropyl thiosulfate และ 4-(4-aminobenzenesulfonamido) benzenesulfonamidoglycine เท่ากับ 2.15x10-3, 3.23x10-3, 3.35x10-3 และ 2.70x10-5 โมล/ลิตร ตามลำดับ หลังจากทำเอนไซม์ให้บริสุทธิ์ขึ้นโดยวิธีแอฟฟินิตีโครมาโตรกราฟฟิ ปรากฏว่าได้ความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 209 เท่า แต่อย่างไรก็ตามจากการทำอะไครลาไมด์เจลอิเลคโตรโรีซิสแบบแท่งพบว่า มีแถบของโปรตีน 7 แถบ อุณหภูมิที่เหมาะสมของการทำงานของเอนไซม์เท่ากับ 45-46 องศาเซลเซียส pH ที่เหมาะสมเท่ากับ 8.58 ค่า Km ของกรดพารา-อะมิโนเบนโซอิกเท่ากับ 2.86x10-5 โมล/ลิตร และค่า Ki ของ sulfanilamide, p-aminobenzenesulfonamidopropyl bromide, N,N'-bis(sulfanilyl)-L-cystine, p-aminobenzenesulfonamidopropyl thiosulfate และ 4-(4-aminobenzenesulfonamido) benzenesulfonamidoglycine เท่ากับ 4.30x10-4, 7.50x10-4, 3.50x10-4, 5.38x10-4 และ 7.50x10-6 โมล/ลิตร ตามลำดับ พบว่าการยับยั้งของสารพวกซัลโฟนาไมด์ทั้ง 5 ชนิด เป็นแบบแข่งขันกับกรดพารา-อะมิโนเบนโซอิก

Abstract: Five sulfonamides were selected to study for their inhibitory activity against dihydropteroate synthase from Escherichia coli by measuring the minimum inhibitory concentration (MIC), the concentration required for 50% inhibition (I50) and the inhibitor constant (Ki). The MIC value for sulfanilamide was 4.30 x 10-2 mol/l when the LB broth was used as a nutrient medium. The MIC values for sulfanilamide and p-aminobenzenesulfonamidopropyl bromide were 1.31 x 10-3 mol/l and 2.91 x 10-3 mol/l, respectively, when the glucose minimum medium was used as a nutrient medium. The enzyme precipitated with 20-60% saturated ammonium sulfate was used for the determination of I50 and the I50 values for sulfanilamide, N,N'-bis(sulfanilyl)-L-cystine, p-aminobenzenesulfonamidopropyl thiosulfate and 4-(4-aminobenzenesulfonamido) benzenesulfonamido-glycine were found to be 2.15 x 10-3, 3.23 x 10-3, 3.35 x 10-3 and 2.70 x 10-5 mol/l, respectively. The purity of the enzyme was increased 209-fold after the affinity chromatography step, however, the enzyme showed seven bands of proteins by acrylamide gel electro-phoresis. The optimal pH and temperature of the enzyme were 8.58 and 45-46 C, respectively. The Km value for p-aminobenzoic acid was 2.86 x 10-5 mol/l. The Ki values for sulfanilamide, p-aminobenzenesulfonamidopropyl bromide, N,N'-bis(sulfanilyl)-L-cystine, p-aminobenzenesulfonamidopropyl thiosulfate and 4-(4-aminobenzenesulfonamido) benzenesulfonamidoglycine were 4.30 x 10-4, 7.50 x 10-4, 3.50 x 10-4, 5.38 x 10-4 and 7.50 x 10-6 mol/l, respectively. All five sulfonamides were competitive inhibitors with p-aminobenzoic acid.

จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. สำนักงานวิทยทรัพยากร

Address: กรุงเทพมหานคร

Email: cuir@car.chula.ac.th

Name: วิชัย สุทธิมูล

Role: ที่ปรึกษา

Created: 2526

Modified: 2561-03-29

Issued: 2561-03-29

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

ISBN: 9745626872

URL: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/10462

tha

DegreeName: วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Level: ปริญญาโท

Descipline: ชีวเคมี

Grantor: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

©copyrights จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	Napaporn_s[1].pdf	14.81 MB

ใช้เวลา

0.01866 วินาที