แจ้งเอกสารไม่ครบถ้วน, ไม่ตรงกับชื่อเรื่อง หรือมีข้อผิดพลาดเกี่ยวกับเอกสาร ติดต่อที่นี่ ==>
หากไม่มีอีเมลผู้รับให้กรอก thailis-noc@uni.net.th
หากไม่มีอีเมลผู้รับให้กรอก thailis-noc@uni.net.th
Natsajee Nualkaew. Geranylgeranyl diphosphate phosphatase enzyme and gene of plaunotol biosynthetic pathway in croton stellatopilosus ohba. Doctoral Degree(Pharmaceutical Chemistry and Natural Products). Chulalongkorn University. Office of Academic Resources. : Chulalongkorn University, 2004.
Geranylgeranyl diphosphate phosphatase enzyme and gene of plaunotol biosynthetic pathway in croton stellatopilosus ohba
เอนไซม์และยีนของเจอรานิลเจอรานิล ไดฟอสเฟต ฟอสฟาเตส ในวิถีชีวสังเคราะห์ของเปลาโนทอลในเปล้าน้อย
Name: Natsajee Nualkaew
LCSH:
Stellatopilosus
LCSH:
Geranylgeranyl
Abstract:
The whole leaves and callus cultures of Croton stellatopilosus Ohba could incorporate [l-³H]geranylgeraniol into plaunotol. Enzymological studies showed that geranylgeranyl diphosphate phosphatase (GGDP phosphatase) activity was present in cell- free extracts of the leaves and of chloroplasts. The crude enzyme extract could be separated into two peaks of GGDP phosphatase acitivities (PI and PII) by gel filtration. Purification and characterization of both enzyme peaks revealed that PI was a tetrameric enzyme of 232 kD with its subunit size of 58 kD. It showed optimum pH of 6.0-6.5, an apparent ATm of 0.2 mM, and a Fmax of 277.8 pkat/mg. PII was a monomeric enzyme of 30-34 kD with an apparent ^m value of 0.1 mM, Fmax of 7.5 nkat/mg and exhibited substrate inhibition. Both PI and PII appeared to be membrane-bound enzymes and their activities could be inhibited by Mo2+. Both preferred GGDP as their substrate rather than geranyl diphosphate or farnesyl diphosphate. Study on the catalysis of the reaction revealed that GGOH was formed from GGDP by two successive monodephosphorylations, rather than a one-step diphosphate dephosphorylation. Cloning of the phosphatase genes from C. stellatopilosus leaves, based on the available information of prenyl diphosphate phosphatase in Swiss-Prot database, was also performed using E. coll as expression system. The results showed that the encoded protein had its molecular weight of 33.6 kD and could exhibit GGDP phosphatase activity. The expressed phosphatase also showed its process of catalytic dephosphorylation by using two sequential steps of monophosphate dephosphorylation from GGDP to GGMP and to GGOH.
Abstract:
การป้อนสารติดฉลากของเจอรานิลเจอรานิออล [1-³H]GGOH เข้าสู่ใบและก้อนคัลลัสของเปล้าน้อย พบว่าสารติดฉลากถูกนำไปใช้ในการสร้างเปลาโนทอล จากการศึกษาด้านเอนไซม์ทำให้ สามารถตรวจพบกิจกรรมของ เอนไซม์เจอรานิลเจอรานิลไดฟอสเฟต ฟอสฟาเตส (GGDP phos phatase) ได้ทั้งในสารสกัดเอนไซม์จากใบและในคลอโรพลาส เมื่อทำการแยกเอนไซม์เบื้องต้น โดยวิธี เจลฟิลเตชัน โครมาโตกราฟี ทำให้พบว่า GGDP phosphatase ในสารสกัดเอนไซม์ มีอยู่สองชนิดคือ PI และ PII การศึกษาคุณสมบัติของเอนไซม์ทำให้พบว่า PI มีน้ำหนักโมเลกุล 232 kD ประกอบด้วย 4 หน่วย ย่อยของโปรตีนที่มีขนาด 58 kD โดยมีค่า Km 0.2 mM ค่า Vmax 277.8 pkat/mg protein และมีสภาวะ การทำงานเหมาะสมที่ pH 6.0-6.5 ในขณะที่เอนไซม์ PII เป็นโปรตีนเดี่ยวที่มีน้ำหนักโมเลกุล 30-34 kD โดยมีค่า Km 0.1 mM ค่า Vmax 7.5 nkat/mg มีสภาวะการทำงานเหมาะสมที่ pH 6.5-7.0 และถูกยับยั้ง การเร่งปฏิกิริยาได้โดยสารตั้งต้นที่ความเข้มข้นสูง นอกจากนี้ยังพบว่า PI และ PII เป็นเอนไซม์ที่เกาะติดกับ ผนังเซลล์ โดยกิจกรรมเอนไซม์สามารถถูกยับยั้งได้โดยโมลิบเดตอิออน เอนไซม์ทั้งสองมีความจำเพาะ ของการใช้เจอรานิลเจอรานิลไดฟอสเฟตสูงที่สุด เมื่อเปรียบเทียบกับการใช้สารตั้งต้น เจอรานิลฟอสเฟต และฟาเนสซิลไดฟอสเฟต การศึกษากระบวนการเร่งปฏิกิริยาของเอนไซม์พบว่า การตัดหมู่ไดฟอสเฟต ออกจากเจอรานิลเจอรานิลไดฟอตเฟต โดยเอนไซม์ PI และ PII เกิดขึ้นโดยผ่านปฏิกิริยา 2 ขั้นตอนคือ จากสารตั้งต้นเจอรานิลเจอรานิลไดฟอสเฟต เปลี่ยนไปเป็นเจอรานิลเจอรานิลโมโนฟอสเฟต และเจอรา นิลเจอรานิออล ตามลำดับ การโคลนยีนจากใบเปล้าน้อย โดยอาศัยข้อมูลของลำดับกรดอะมิโนของพรีนิลไดฟอสเฟต ฟอสฟาเตส จากฐานข้อมูล Swiss-Prot ทำให้ได้ยีนที่สามารถถอดรหัสโปรตีนขนาด 33.6 kD และยังคงแสดงกิจกรรมเอนไซม์เจอรานิลเจอรานิลไดฟอสเฟต ฟอสฟาเตส เอนไซม์ฟอสฟาเตส ที่แสดงออกนี้ มีกระบวนการเร่งปฏิกิริยาการเปลี่ยนจาก GGDP ไปเป็น GGOH ในแบบ 2 ขั้นตอน เช่นเดียวกับเอนไซม์ GGDP phosphatase ที่แยกได้จากส่วนใบ คือจาก GGDP ผ่าน GGMP ไปเป็น GGOH ในที่สุด
Chulalongkorn University. Office of Academic Resources
Address:
BANGKOK
Email:
cuir@car.chula.ac.th
Name: Wanchai De-Eknamkul
Role:
advisor
Name: Meinhart H. Zenk
Role:
advisor
Created:
2004
Modified:
2560-07-28
Issued:
2017-06-18
วิทยานิพนธ์/Thesis
application/pdf
ISBN:
9745320919
eng
DegreeName: Doctor of Philosophy
Level: Doctoral Degree
Descipline: Pharmaceutical Chemistry and Natural Products
Grantor: Chulalongkorn University
©copyrights Chulalongkorn University
RightsAccess:
ใช้เวลา
0.045235 วินาที
Natsajee Nualkaew
| Title | Contributor | Type |
|---|---|---|
| Geranylgeranyl diphosphate phosphatase enzyme and gene of plaunotol biosynthetic pathway in croton stellatopilosus ohba
จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย Natsajee Nualkaew | Wanchai De-Eknamkul Meinhart H. Zenk | วิทยานิพนธ์/Thesis |
Wanchai De-Eknamkul
Meinhart H. Zenk
| Title | Creator | Type and Date Create |
|---|---|---|
| Geranylgeranyl diphosphate phosphatase enzyme and gene of plaunotol biosynthetic pathway in croton stellatopilosus ohba
จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย Wanchai De-Eknamkul;Meinhart H. Zenk | Natsajee Nualkaew | วิทยานิพนธ์/Thesis |