การคัดกรองและลักษณะสมบัติของแบคทีเรียที่สามารถผลิตเอนไซม์ไลเพสจากอาหารหมัก

SCREENING AND CHARACTERIZATION OF LIPASE PRODUCING BACTERIA FROM FERMENTED FOODS

Name: มุกขะรินทร์ พุทโธสาวะโก

ThaSH: แบคทีเรีย

Abstract: การคัดแยกและคัดกรองแบคทีเรียที่สามารถผลิตเอนไซม์ไลเพสทั้งหมด 197 ไอโซเลทจากอาหารหมัก 56 ตัวอย่าง ได้แก่ ไส้กรอกเปรี้ยว แหนม ปลาร้า ปลาเจ่า ปลาจ่อม กุ้งจ่อม และหม่ำ พบว่ามีทั้งสิ้น 60 ไอโซเลทซึ่งมีค่ากิจกรรมของเอนไซม์ไลเพส อยู่ในช่วง 0.01 – 21.52 U/ml เมื่อนำมาศึกษาลักษณะทางฟีโนไทป์และการวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ 16S rRNA gene พบว่า สามารถจัดกลุ่มแบคทีเรียแกรมบวกที่มีรูปร่างกลม 14 ไอโซเลทอยู่ในสกุล Staphylococcus (13 ไอโซเลท) และ Micrococcus (1 ไอโซเลท) และพิสูจน์เอกลักษณ์ได้เป็น Staphylococcus sp. (6 ไอโซเลท), S. sciuri (2 ไอโซเลท), S. condimenti (2 ไอโซเลท) และอย่างละ 1 ไอโซเลทของ S. simulans, S. lentus, S. gallinarum และ M. yunnanensis โดยมีความคล้ายคลึงของลำดับนิวคลีโอไทด์เป็น 99.55 – 100% จัดเป็นแบคทีเรียแกรมบวกที่มีรูปร่างแท่ง 10 ไอโซเลท อยู่ในสกุล Bacillus (7 ไอโซเลท), Paenibacillus (1 ไอโซเลท), Brevibacterium (1 ไอโซเลท) และ Corynebacterium (1 ไอโซเลท) และพิสูจน์เอกลักษณ์ได้เป็น B. cereus (2 ไอโซเลท) และอย่างละ 1 ไอโซเลทของ B. methylotrophicus, B. pumilus, B. flexus, B. subtilis, B. anthracis, Paenibacillus pasadenensis, Brevibacterium salitolerans และ Corynebacterium liquefaciens โดยมีความคล้ายคลึงของลำดับนิวคลีโอไทด์เป็น 99.33 – 100 % และจัดเป็นแบคทีเรียแกรมลบที่มีรูปร่างแท่ง 10 ไอโซเลท และพิสูจน์เอกลักษณ์ได้เป็น Proteus mirabilis (9 ไอโซเลท) และ Klebsiella pneumonia (1 ไอโซเลท) โดยมีความคล้ายคลึงของลำดับนิวคลีโอไทด์เป็น 99.78 – 100 % นอกจากนี้ยังพบแบคทีเรียกรดแลคติกจำนวน 26 ไอโซเลท ซี่งพิสูจน์เอกลักษณ์ได้เป็น Lactobacillus pentosus (5 ไอโซเลท), Lactobacillus sp. (12 ไอโซเลท), Pediococcus sp. (3 ไอโซเลท) และอย่างละ 1 ไอโซเลทของ Pediococcus pentosaceus, Pediococcus lolii, Weissella thailandensis, W. cibaria, W. paramesenteroides และ Leuconostoc fallax โดยมีความคล้ายคลึงของลำดับนิวคลีโอไทด์เป็น 99.78 – 100 % อีกด้วย จากผลการคัดกรองการผลิตเอนไซม์ไลเพส พบว่าไอโซเลท KM17-4 ซึ่งพิสูจน์เอกลักษณ์ได้เป็น S. condimenti ให้ค่ากิจกรรมของเอนไซม์สูงสุด จึงนำมาศึกษาสภาวะที่เหมาะสมในการผลิตเอนไซม์ไลเพสในอาหารเหลว Nutrient ที่เติม Tween 80 ร้อยละ 1 พบว่าสามารถผลิตได้เหมาะสมที่พีเอช 7 และบ่มที่ 30 องศาเซลเซียส นาน 18 ชั่วโมง นอกจากนี้เมื่อเลี้ยง B. subtilis SS48-5 ในอาหารที่เติม Tween 80 พีเอช 7.5 นาน 24 ชั่วโมง มีค่ากิจกรรมสูงสุด 3.23 U/ml พบว่าสายพันธุ์นี้ผลิตได้เหมาะสมที่พีเอช 7.5 เมื่อบ่มที่ 40 องศาเซลเซียส นาน 30 ชั่วโมง ในขณะที่ Proteus mirabilis PR11-3 มีค่ากิจกรรมสูงสุด 0.57 U/ml และผลิตได้เหมาะสมที่พีเอช 8 เมื่อบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส นาน 18 ชั่วโมง

Abstract: The isolation and screening of one hundred and ninety seven lipase-producing bacteria from 56 fermented food samples including sai-krog-prieo, nham, pla-ra, pla-chao, pla-chom, kung-chom and mum were carried out. The results revealed that 60 isolates showed lipase activity ranged from 0.01 - 21.52 U/ml. On the basis of their phenotypic characteristics and 16S rRNA gene sequence analysis, 14 isolates of Gram-positive cocci belonged to genera Staphylococcus (13 isolates) and Micrococcus (1 isolate) were identified as Staphylococcus sp. (6 isolates), S. sciuri (2 isolates), S. condiment (2 isolates) and each isolate of S. simulans, S. lentus, S. gallinarum and Micrococcus yunnanensis based on 99.55 – 100 % sequence similarity. Eleven isolates of Gram-positive rod shaped belonged to genera Bacillus, Paenibacillus, Brevibacterium and Corynebacterium were identified as B. cereus (2 isolates) and each isolate of B. methylotrophicus, B. pumilus, B. flexus, B. subtilis, B. anthracis, Paenibacillus pasadenensis, Brevibacterium salitolerans and Corynebacterium liquefaciens based on 99.33 – 100 % sequence similarity. Eleven isolates of Gram-negative rod shaped were identified as Proteus mirabilis (9 isolates) and Klebsiella pneumonia (1 isolate) based on 99.78 – 100% sequence similarity). In addition, 26 isolates of lactic acid bacteria were identified as Lactobacillus pentosus (5 isolate), Lactobacillus sp. (12 isolates), Pediococcus sp. (3 isolates) and each isolate of Pediococcus pentosaceus, Pediococcus lolii, Weissella thailandensis, W. cibaria, W. paramesenteroides and Leuconostoc fallax based on sequence 99.78 – 100 % similarity. The potent isolate KM17-4 identified as Staphylococcus condimenti was selected to determine on the effects for lipase production. The results revealed that KM17-4 exhibited high lipase activity on Tween 80 at pH 7, 30 Cº and incubated for 18 h. In addition, B. subtilis SS48-5 exhibited 3.23 U/ml of the highest activity when cultivated on Tween 80 at pH 7.5 for 24 h. The optimum temperature for lipase production of this strain was at 40 ˚C after incubated for 30 h. Whereas, Proteus mirabilis PR11-3 exhibited 0.57 U/ml of the highest lipase production activity and the optimum temperature was at 37 ˚C, pH 8 after incubated for 18 h.

จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. สำนักงานวิทยทรัพยากร

Address: กรุงเทพมหานคร

Email: cuir@car.chula.ac.th

Name: สุวิมล กีรติพิบูล

Role: ที่ปรึกษา

Name: สมบูรณ์ ธนาศุภวัฒ

Role: ที่ปรึกษา

Created: 2556

Modified: 2559-08-27

Issued: 2559-08-27

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

URL: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/42613

tha

DegreeName: วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Level: ปริญญาโท

Descipline: เทคโนโลยีทางอาหาร

Grantor: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

©copyrights จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	5372305023.pdf	4.77 MB	24	2024-10-14 01:39:46

ใช้เวลา

0.026625 วินาที