Production of Antibody (IgY) from Egg for Feed Additive and Enhance Pork Quality

การผลิตแอนติบอดี (IgY) จากไข่ไก่เพื่อเป็นอาหารเสริมและเพิ่มคุณภาพเนื้อสุกร

Name: Duangkamol Prungwitaya

Name: ดวงกมล ปรุงวิทยา

keyword: Fat Reduction

Abstract: Reduction of fat content in meat-producing animals is highly desirable for both consumers and producers. Control of fat storage in porcine adipose tissue by immunological methods using an antibody specific to adipocyte plasma membrane is one of many approaches. Thus, production and characterization of immunoglobulin Y (IgY) specific to porcine adipocyte plasma membrane from chicken egg was carried out in this study for further used in fat reduction. Porcine adipocytes were first isolated from adipose tissues and then the membrane was extracted, fractionated by centrifugation and partial purified by ultracentrifugation using sucrose gradient. The partial purified adipocyte membrane was subsequently used to immunize laying hens (Hisex). Eggs laid by immunized hens were collected throughout the antibody production phase. The IgY was then extracted from egg yolk in which its presence was determined by EnzymeLink Inununosorbent Assay (ELISA). Inununocytochemistry and immunohistochemistry were performed in order to determine the specificity of the IgY to isolated adipocytes and adipocytes in adipose tissue, respectively. It was found that the IgY specifically bound to the membranes of both the isolated adipocytes and adipocytes in adipose tissue. This IgY was also found weakly bind to muscle tissue but not muscle fiber. It also weakly bound to spleen tissues. This is due probably to the presence of some small numbers of adipocytes surrounded or infiltrated muscle or spleen tissues with no direct effect on the tissues. Since the IgY will be used by oral application, its pH stability was therefore determined. The IgY was stable at pH 6 and 7. However, the activity was reduced after incubation in acid condition. IgY activity remained approximately at 74 and 57 percent after 1 hr incubation at pH 3 and pH 2, respectively. Since more than half of IgY activities remained after the IgY was exposed to these acid conditions for 1 hr, the duration to be in stomach, it could be supplied together with swine feed for reduce fat contained in the tissues.

Abstract: การลดไขมันสะสมในสัตว์ซึ่งเป็นแหล่งผลิตอาหารเป็นที่ต้องการของทั้งผู้บริโภคและผู้ผลิต การใช้ แอนติบอดีที่จำเพาะต่อเซลล์ไขมันของสุกรเป็นหนึ่งในวิธีการต่างๆ ที่ใช้ควบคุมไขมันสะสมในสุกร ดังนั้นในการศึกษานี้จึงได้ทำการผลิต และศึกษาคุณสมบัติของแอนติบอดีชนิดอิมมูโนกลอบูลินวาย (IgY) ที่จำเพาะต่อเยื่อหุ้มเซลล์ไขมันของสุกรจากไข่ไก่ เพื่อนำไปใช้เพื่อการลดไขมันในสุกร โดย เริ่มจากทำการแยกเซลล์ไขมันจากเนื้อเยื่อไขมัน แล้วทำให้เซลล์แตก จากนั้นนำมาปั่นแยกเยื่อหุ้ม เซลล์ไขมันออกจากองค์ประกอบอื่นๆ หลังจากนั้นจึงนำมาปั่นด้วยความเร็วสูงบนชั้นสารละลาย ซูโครส (sucrose gradient) เพื่อแยกเยื่อหุ้มเซลล์ไขมันของสุกรให้มีโปรตีนอื่นปะปนน้อยที่สุด เยื่อ หุ้มเซลล์ที่เตรียมได้ถูกนำไปฉีดกระตุ้นการสร้าง IgY ในไก่สายพันธุ์ Hisex ซึ่งอยู่ในระยะออกไข่ หลังจากนั้นทำการเก็บไข่ และสกัด IgY จากไข่แดง แล้วทำการตรวจสอบแอนติบอดีที่จำเพาะต่อ เยื่อหุ้มเซลล์ไขมันของสุกรด้วยเทคนิค Enzyme-Link Inmunosorbent Assay (ELISA) หลังจากตรวจ พบการสร้าง IgY ที่จำเพาะแล้วทำการตรวจสอบคุณสมบัติของ IgY เพิ่มเติม โดยใช้เทคนิค Immunocytochemistry เพื่อการตรวจสอบความจำเพาะกับเซลล์ไขมัน และใช้เทคนิค Immunohisto- chemisty เพื่อการตรวจสอบกับเนื้อเยื่อไขมัน ผลการตรวจสอบพบว่า IgY มีความจำเพาะต่อเซลล์ ไขมันที่สกัดจากเนื้อเยื่อไขมัน และมีความจำเพาะต่อเซลล์ไขมันในเนื้อเยื่อไขมันด้วย อย่างไรก็ตาม พบว่า IgY สามารถจับกับเนื้อเยื่อกล้ามเนื้อ และเนื้อเยื่อม้ามด้วย โดยให้สัญญาณการจับที่อ่อนกว่า การจับแบบจำเพาะกับเยื่อหุ้มเซลล์ไขมันในเนื้อเยื่อไขมัน ทั้งนี้อาจเป็นเพราะเนื้อเยื่อกล้ามเนื้อ และเนื้อเยื่อม้ามอาจมีเซลล์ไขมันแทรกอยู่ด้วย และเนื่องจาก IgY ที่ผลิตได้จะนำมาใช้โดยการให้ สุกรกิน ดังนี้นจึงทำการตรวจสอบเสถียรภาพของ IgY ในสภาวะที่เป็นกรด พบว่า IgY มีเสถียร ภาพเมื่ออยู่ในสภาวะ pH 6 และ pH7 และเมื่ออยู่ในสภาวะกรดที่ pH 3 และ pH 2 เป็นเวลา 2 ชั่วโมง ตรวจพบกิจกรรมที่เหลือของ IgY ได้ 74 และ 57 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ ซึ่งช่วงเวลา 1 ชั่วโมง นั้น เป็นช่วงเวลาที่อาหารอยู่ในส่วนกระเพาะของสุกร ดังนั้น IgY นี้จึงมีความเหมาะสมในการนำไปใช้ ผสมในอาหารสุกรเพื่อใช้บริโภคโดยไม่มีผลกระทบต่อกิจกรรมของ IgY

King Mongkut's University of Technology Thonburi. KMUTT Library

Address: BANGKOK

Email: info.lib@mail.kmutt.ac.th

Name: Kanokwan Poomputsa

Role: Advisor

Created: 2009

Modified: 2556-05-06

Issued: 2013-05-06

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

CallNumber: BIT609

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Biotechnology

Grantor: King Mongkut's University of Technology Thonburi

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	BIT609.pdf	1.44 MB	12	2024-01-17 13:18:26
2	BIT609ab.pdf	55.52 KB	6	2024-01-17 13:18:00

ใช้เวลา

0.028856 วินาที