Studies on the activation factors of rubber biosynthesis in small rubber particles of hevea brasiliensis latex

การศึกษาตัวแปรที่มีผลกระตุ้นการสังเคราะห์ยางในอนุภาคยางขนาดเล็กของน้ำยางฮีเวียบราซิเลียนสิส

Name: Paveena Nawakitkosol

LCSH: Polymers -- Synthesis

LCSH: Rubber

LCSH: Rubber chemistry

Abstract: Small rubber particle (SRP) was prepared from rubber in zone 2 of Hevea brasiliensis latex by continuous steps of high-speed centrifugation at 12,000 rpm and then 19,000 rpm for 30 min and 60 min, respectively, at 4oC. SRP was proved to be composed of linear and active rubber molecules, so it is suitable for the in vitro rubber biosynthesis. Washed SRP (WSRP) prepared by ultracentrifugation or gel-filtration chromatography was used as material for synthesis of the in vitro rubber. In the preparation of WSRP, washing serum fraction was separated from rubber fraction. This washing serum was added back to the incubation of WSRP for testing the activation effect. It is found that the washing serum could activate the in vitro rubber biosynthesis. The study was an attempt to elucidate the factors in washing serum separated from SRP of Hevea brasiliensis latex that can give the highest IPP incorporation into the in vitro rubber. The main activation factors were found to be allylic diphosphates or proteins. In the testing of allylic diphosphate, thin layer chromatography (TLC) showed that the medium-chain allylic diphosphate was not detected in the lower fractions separated from washing serum by Microcon. In addition, there were no differences in the activity of the butanol extracts of lower fraction separated by TLC in each fraction. This indicates that the allylic diphosphate could not be detected from washing serum of SRP. In the case of protein testing in washing serum, it was investigated by heat and trypsin procedures, which are known as good methods to degrade protein. After heat and trypsin treatments, there was no more activity of rubber biosynthesis. This implies that the activity in SRP predominantly resulted from the proteins. Thus, the activator protein was further purified from washing serum by the chromatography techniques. These were anionexchange chromatography, gel-filtration chromatography and hydroxyapatite chromatography. It is found that the activator protein can activate the IPP incorporation into the in vitro rubber. However, the activator protein band cannot be detected by SDS-PAGE due to its low amount

Abstract: อนุภาคยางขนาดเล็กสามารถเตรียมได้จากยางในโซน 2 ของน้ำยางฮีเวีย บราซิเลียนสิสโดยการปั่น อย่างต่อเนื่องด้วยเครื่องปั่นความเร็วสูงที่ 12,000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 30 นาที และ 19,000 รอบต่อนาที เป็น เวลา 60 นาที ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส อนุภาคยางขนาดเล็กประกอบด้วยโมเลกุลของยางที่เป็นเส้นตรงที่ สามารถเกิดปฏิกิริยาต่อได้ ดังนั้น จึงเหมาะสำหรับศึกษาการสังเคราะห์ยางในหลอดทดลอง อนุภาคยางขนาดเล็กที่ ได้จากการล้าง (WSRP) โดยการปั่นด้วยความเร็วสูง และจาก gel-filtration chromatography เป็น 2 ระบบที่ นำมาใช้สำหรับการสังเคราะห์ยางในหลอดทดลอง ซึ่งการเตรียม WSRP สามารถแยกส่วนของเซรั่ม (washing serum) ออกจากส่วนของยางได้ เมื่อเติมเซรั่มกลับลงในการบ่มกับ WSRP เพื่อทดสอบการกระตุ้น พบว่าเซรั่มนี้ สามารถกระตุ้นการสังเคราะห์ยางในหลอดทดลองได้ ดังนั้น งานวิจัยนี้ คือความพยายามที่จะทำให้ชัดเจนว่าตัวแปรใดในเซรั่มที่แยกจาก SRP ของน้ำยาง ฮีเวีย บราซิเลียนสิสสามารถกระตุ้นการสังเคราะห์ยางในหลอดทดลองได้สูงที่สุด ซึ่งตัวแปรหลัก 2 ชนิดที่สนใจ คือ allylic diphosphate และโปรตีน ในส่วนของการทดสอบ allylic diphosphate ด้วยเทคนิคโครมาโตกราฟี (TLC) แสดงให้เห็นว่าไม่พบ allylic diphosphate สายโซ่ขนาดกลางในสารละลายส่วนล่างที่แยกจากเซรั่มโดย การกรองผ่านไมโครคอน นอกจากนี้ ยังไม่พบผลการกระตุ้นที่ชัดเจนจากการนำสารสกัดบิวทานอลของส่วนล่างที่ แยกจากเซรั่มไปแยกโดยเทคนิค TLC จากผลการทดลองทั้งสองชี้ให้เห็นว่าไม่มีการตรวจพบ allylic diphosphate จากเซรั่มของ SRP ในกรณีของการทดสอบโปรตีนโดยวิธีการให้ความร้อน และการใช้เอนไซม์ทริปซิน พบว่า เซรั่มที่ผ่านการย่อยด้วยวิธีทั้งสองแล้วจะไม่สามารถกระตุ้นการสังเคราะห์ยางได้อีก ดังนั้น ความสามารถในการ สังเคราะห์ยางของ SRP จึงเป็นผลจากการกระตุ้นของโปรตีนมากกว่า ด้วยเหตุนี้ โปรตีนที่ให้ผลการกระตุ้นจะ ได้รับการแยกโดยเทคนิคโครมาโตกราฟี ได้แก่ anion-exchange, gel-filtration และ hydroxyapatite chromatography พบว่า โปรตีนที่แยกได้นี้สามารถกระตุ้นการสังเคราะห์ยางในหลอดทดลองได้ แต่อย่างไรก็ตาม แถบของโปรตีนไม่สามารถตรวจพบได้ด้วย SDS-PAGE เนื่องจากปริมาณของโปรตีนที่น้อยเกินไป

Mahidol University

Address: NAKHONPATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Jitladda Sakdapipanich

Role: Thesis Advisors

Created: 2009

Modified: 2553-06-19

Issued: 2010-06-19

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

CallNumber: TH P337s 2009

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Polymer Science and Technology

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4937464.pdf	1.06 MB	32	2018-05-29 14:09:12

ใช้เวลา

0.251204 วินาที