The relationship between Burkholderia Pseudomallei RpoS and OxyR expressions in the intracellular environment of human neutrophils

การศึกษาความสัมพันธ์ของการแสดงออกของยีน RpoS และ OxyR ของเชื้อ Burkholderia pseudomallei ภายในเม็ดเลือดขาวชนิดนิวโทรฟิลของมนุษย์

Name: Namkang Sriwattanarothai

LCSH: Burkholderia pseudomallei

LCSH: Neutrophils

Abstract: The intracellular survival of Burkholderia pseudomallei is important in the pathogenesis of infection. B. pseudomallei can persist in a dormant stage for months or years. Relapse after apparent cure and recurrences of infection make treating this disease difficult. One important factor which helps them survive during and after infection is the microbial oxidative stress response. The regulation of RpoS and OxyR regulons is also in this category. In this study, it is hypothesized that these 2 regulatory systems may be involved in B. pseudomallei survival inside the human neutrophils under an oxidative stress condition. First, the condition for phagocytosed process was determined. The appropriate ratio between B. pseudomallei rpoS expression in human neutrophils are 10:1 and 15:1. The optimal coincubation time is 90 minutes. To prove whether conditions inside neutrophils are stressful for B. pseudomallei, the β- galactosidase production of intracellular rpoSp lac Z transcription fusion was measured. The result showed that B. pseudomallei rpoS intracellular ratios of 10:1 and 15:1 increased 2- and 3- fold more than the control, respectively. Therefore, the intracellular environment of human neutrophils produced stress factors which affected rpoS expression. By this method, the harvested cells of B. pseudomallei were too low for other applications. The developing method was performed by coincubation of the whole white blood cells lysate with B. pseudomallei (so called in situ condition). The results showed the B. pseudomallei rpoS expression at 90 minutes was 3- fold more than control. This in situ process can be used to imitate the intracellular environment of human neutrophils. To determine the relationship between RpoS and OxyR regulatory systems after in situ conditions, the oxyR, dpsA and sodB expression detected by RT-PCR was determined. The results showed that the expression levels of dpsA and sodB were 1.3 and 1.9 times higher than control, respectively; whereas, the oxyR remained unchanged. The findings suggest that the B. pseudomallei RpoS regulon is involved in the intracellular environment of human neutrophils, while OxyR regulon involvement is inconclusive

Abstract: การอยู่รอดภายในเซลล์ของเชื้อ Burkholderia pseudomallei เป็นสิ่งสำคัญในการก่อโรค ปัจจัยหนึ่งที่เป็นส่วนสำคัญและทำให้เชื้อแบคทีเรียชนิดนี้อยู่รอดระหว่างและหลังการติดเชื้อ คือ ความสามารถในการตอบสนองต่อสภาวะเครียดชนิดที่มีออกซิเจนเข้ามาเกี่ยวข้อง ซึ่งการทำงานของ ระบบการควบคุม RpoS และ OxyR จัดเป็นหนึ่งในการตอบสนองชนิดนี้ คาดว่าระบบการควบคุม ทั้งสองชนิดนี้น่าจะมีส่วนเกี่ยวข้องกับการอยู่รอดของเชื้อภายในเม็ดเลือดขาวชนิดนิวโทรฟิล การศึกษานี้เริ่มจากหาสภาวะการกินเชื้อโดยนิวโทรฟิล พบว่า อัตราส่วนระหว่างเชื้อกับนิวโทรฟิลที่ เหมาะสมต่อการแสดงออกของยีน rpoS คือ 10:1 และ 15:1ที่เวลา 90 นาที การแสดงออกของยีน rpoS ในสภาวะทั้งสองอัตราส่วนนี้เพิ่มขึ้นกว่าในสภาวะควบคุม (control) 2 และ 3 เท่าตามลำดับ เนื่องจากจำนวนแบคทีเรียที่ได้จากการทดลองมีปริมาณน้อย ทำให้วิธีนี้ไม่เหมาะต่อการนำไปทำการ ทดลองอื่น ดังนั้นจึงมีการพัฒนาวิธีใหม่ด้วยการcoincubateระหว่างเชื้อกับ WBC lysate พบว่า เมื่อทำการทดลอง90 นาที การแสดงออกของยีน rpoS เพิ่มขึ้นถึง 3 เท่า จากผลการทดลองนี้แสดง ให้เห็นว่าวิธีนี้สามารถนำมาใช้แทนวิธีการกินเข้าไปในเซลล์ได้ ดังนั้นจึงนำเชื้อไปทำการทดลองต่อ โดยการวัดการแสดงออกของยีนที่อยู่ภายใต้การควบคุมของระบบการควบคุม RpoS และ OxyR ด้วย RT-PCR พบว่า การแสดงออกของยีน dpsA และ sodB เพิ่มขึ้น 1.3 และ 1.9 เท่าตามลำดับ แต่ การแสดงออกของยีน oxyR ไม่มีการเปลี่ยนแปลง การศึกษานี้สามารถคาดการณ์ได้ว่า ระบบ การควบคุม RpoS มีส่วนเกี่ยวข้องกับการอยู่ภายในนิวโทรฟิล ในขณะที่ระบบการควบคุม OxyR ยังไม่สามรถสรุปได้ และยังอยู่ระหว่างการดำเนินการณ์ต่อไป

Mahidol University

Address: NAKHONPATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Sumalee Tungpradabkul

Role: Thesis Advisors

Created: 2006

Modified: 2010-06-17

Issued: 2010-06-17

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

CallNumber: TH N174r 2006

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Biochemistry

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4636732-scan.pdf	1.34 MB	3	2018-05-29 13:42:30

ใช้เวลา

-0.716908 วินาที