Activation of cholangiocarcinoma cell invasiveness by TNF-alpha

กลไกการแพร่กระจายของเซลล์มะเร็งท่อน้ำดีโดยการกระตุ้นจาก TNF-alpha.

Name: Panthip Rattanasinganchan

LCSH: Cholangiocarcinoma

LCSH: Matrix Metalloproteinase 9

LCSH: Tumor Necrosis Factor-alpha

Abstract: Cholangiocarcinoma (CCA) in Thai patients is closely associated with liver fluke infection and chronic inflammation. TNF-α is a cytokine that has been shown to be involved in immunity and inflammation by eliciting a broad spectrum of responses, including cell motility, proliferation, apoptosis and MMP secretion. This study investigated if, and how, TNF-α is involved in controlling the invasiveness of cholangiocarcinoma using RMCCA-1 cell line that was established as a model. A cholangiocarcinoma cell line was successfully established from a Thai patient, named RMCCA-1. The cell line expressed general characteristics of biliary epithelium and retained some characteristics of the original tumor including overexpression of the tumor marker CA19-9. It also exhibited a high degree of in vitro motility, although the invasiveness was low. The RMCCA-1 cell expressed a TNFRII receptor as determined by RT-PCR. It remains unproven whether RMCCA-1 expressed TNFRI, as an aberrant-sized PCR product was amplified when primers specific for TNFRI receptor were used. To understand the role of TNF-α in regulating the invasiveness of cholangiocarcinoma, the RMCCA-1 cells were treated with various doses of TNF- α and assayed for in vitro invasiveness. In vitro invasion of RMCCA-1 increased dosedependently with TNF-α treatment while cell proliferation was virtually unaltered. MMP-9 activity in the conditioned medium increased in response to TNF-α, although independent of the dosage applied. Enhancement of in vitro invasion and MMP-9 activity was significantly reduced by inhibitors of ERK1/2, PI3-kinase and NF-kB, suggesting that the TNF-α-activated phenotypes were mediated by these molecular signaling pathways. Involvement of ERK1/2, PI3-kinase and NF-kB-mediated signaling was confirmed by a Western Blot. Furthermore, LY294002 and U0126 suppressed phospho-S6 ribosomal protein and phospho-42/44 MAPK, but not NF-kB translocation which was, instead, blocked by PSI. Proteomics analysis of RMCCA-1 cells treated with 100 ng/ml TNF-α demonstrated a significant up-regulation of CDC42, correlating with enhancement of in vitro invasiveness by TNF-α.

Abstract: โรคมะเร็งท่อน้ำดีในคนไทยมีความสัมพันธ์กับพยาธิใบไม้ในตับและการอักเสบเรื้อรัง TNF-α คือไซโตไคน์ที่มีความสัมพันธ์กับภูมิคุ้มกันและการอักเสบซึ่งมีผลต่อการตอบสนองต่อการเคลื่อนที่ ของเซลล์, การเพิ่มจำนวนของเซลล์, การตายของเซลล์ และการหลั่งเอนไซม์ MMP ในงานวิจัยนี้เป็นการศึกษากลไกการแพร่กระจายของเซลล์มะเร็งท่อน้ำดี โดยการกระตุ้นจาก TNF-α โดยใช้เซลล์ RMCCA-1 ซึ่งเป็นเซลล์มะเร็งท่อน้ำดีที่เพาะเลี้ยงขึ้นเองเป็นแบบอย่าง RMCCA-1 เป็นเซลล์ลายน์ที่ประสบความสำเร็จจากการนำชิ้นเนื้อมะเร็งท่อน้ำดีของชายไทย ที่ป่วยมะเร็งท่อน้ำดีเพาะเลี้ยงและพบว่า RMCCA-1 คงคุณสมบัติเช่นเดียวกับชิ้นเนื้อมะเร็งคือมี การหลั่งโปรตีนซึ่งเป็นดัชนีบ่งชี้มะเร็งคือ CA19-9 สูงมากกว่าค่าปกติ นอกจากนี้ RMCCA-1 ยังมี ความสามารถในการเคลื่อนที่สูงแต่ความสามารถในการบุกรุกต่ำในภาวะปกติ การวิเคราะห์โดยวิธี RT-PCR พบ TNFRII และพบความผิดปกติในการแสดงออกของ TNFRI ใน RMCCA-1 เพื่อศึกษากลไกการบุกรุกของเซลล์มะเร็งจึงกระตุ้นด้วย TNF-α พบว่าเพิ่มการบุกรุกของเซลล์ ตามขนาดความเข้มข้นในขณะที่การแบ่งตัวของเซลล์ไม่เปลี่ยนแปลง และยังพบว่า TNF-α ได้ กระตุ้นการหลั่งและการแสดงออกของ MMP-9 การกระตุ้นการบุกรุกและ MMP-9 ของ เซลล์มะเร็งท่อน้ำดีโดย TNF-α ถูกยับยั้งโดยสารยับยั้งต่อ MAPK, PI3K pathway และการ เคลื่อนที่เข้าสู่นิวเคลียสของ NF-kB จึงกล่าวได้ว่าการกระตุ้นนี้ผ่านโมเลกุลเหล่านี้ซึ่งทดสอบยืนยัน โดยวิธี western blot นอกจากนี้การใช้สารยับยั้งการกระตุ้น MAPK, PI3K และ NF-kB pathway มีผลต่อการลดการบุกรุกของเซลล์มะเร็งท่อน้ำดีและการหลั่งของ MMP-9 ซึ่งยืนยันโดย Western Blot นอกจากนี้ PSI ยับยั้ง NF-kB เคลื่อนที่เข้านิวเคลียสในขณะที่ LY294002และ U0126 ซึ่งยับยั้งการกระตุ้น phospho-S6 และ phospho-42/44 MAPK ไม่สามารถยับยั้งได้ การ วิเคราะห์ด้วยวิธี proteomics พบว่า 100 ng/ml TNF-α กระตุ้นการแสดงออกของ CDC42 โปรตีนอย่างเด่นชัดซึ่งมีความสัมพันธ์กับการเคลื่อนที่และบุกรุกของเซลล์มะเร็ง

Mahidol University

Address: NAKHONPATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Rutaiwan Tohtong

Role: Thesis Advisors

Created: 2008

Modified: 2553-06-22

Issued: 2010-06-14

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

CallNumber: TH P197a 2008

eng

DegreeName: Doctor of Philosophy

Level: Doctoral Degree

Descipline: Biochemistry

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4637318.pdf	2.29 MB	42	2026-05-26 18:16:01

ใช้เวลา

0.425632 วินาที