Cloning, characterization and expression of Vasa-like gene in the germ cells of giant freshwater prawn, Macrobrachium Rosenbergii

การศึกษาการโคลนและการแสดงออกของยีน vasa-like ในเซลล์สืบพันธุ์ของกุ้งก้ามกราม

Name: La-Iad Nakkrasae

LCSH: Macrobrachium rosenbergii

MeSH: Shrimp culture

MeSH: Germ Cells

MeSH: Ovary

MeSH: Testis

Abstract: A vasa-like gene, Mrvlg, from the ovary of the giant freshwater prawn, Macrobrachium rosenbergii, was isolated and characterized by a reverse transcriptionpolymerase chain reaction (RT-PCR) method. A full-length sequence was obtained by the rapid amplification of cDNA end (RACE-PCR) method. Analysis of the nucleotide sequence revealed that Mrvlg comprised 2,686 bps with an open reading frame of 2,133 bps encoding 710 amino acids. The deduced amino acid sequence contained four arginine-glycine-glycine motifs, three zinc-finger motifs and eight conserved motifs belonging to the DEAD-box protein family. The MrVLG sequence showed high similarity to Vasa homologue of zebrafish (73%). The Mrvlg transcripts were specifically detected in the germ cells of the adult gonads and also detected in early embryonic and larval stages. In situ hybridization analysis showed that Mrvlg RNA was detected in the cytoplasm of oogonia, previtellogenic and vitellogenic oocytes and was also detected in the nucleoplasm of mature oocytes. Similarly, the Mrvlg transcripts were detected in the cytoplasm of spermatogonia and primary spermatocytes and in the nuclei of secondary spermatocytes and sperm. Sequence similarity and specific localization in the germ cells suggest that Mrvlg is the prawn vasa homologue of the Drosophila gene and can be used as a molecular marker for prawn germ cells

Abstract: ยีน vasa-like หรือ Mrvlg ได้ถูกโคลนแยกด้วยกระบวนการ reverse transcriptionpolymerase chain reaction (RT-PCR) จากรังไข่ของกุ้งก้ามกราม (Macrobrachium rosenbergii) ได้ทำการสังเคราะห์นิวคลีโอไทด์สายสมบูรณ์ของ Mrvlg โดยกระบวนการ rapid amplification of cDNA end (RACE) การวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีน Mrvlg พบว่ามี ความยาว 2,686 เบส ประกอบด้วย open reading frame 2,133 เบส ซึ่งถอดรหัสให้โปรตีน ประกอบด้วยกรดอะมิโน 710 ตัว มีลำดับกรดอะมิโน arginine-glycine-glycine 4 ตำแหน่ง ลำดับกรดอะมิโน zinc-finger 3 ตำแหน่ง และลำดับกรดอะมิโนอนุรักษ์ 8 ตำแหน่ง ซึ่งเป็น ตำแหน่งอนุรักษ์ที่พบในกลุ่มยีน DEAD-box ลำดับกรดอะมิโนของ MrVLG มีความคล้ายคลึงกับ ลำดับกรดอะมิโน Vasa ของ zebrafish (73%) การแสดงออกในระดับ RNA ของ Mrvlg พบว่ามี ความจำเพาะในเซลล์สืบพันธุ์ของกุ้งก้ามกรามตัวเต็มวัย นอกจากนี้ยังพบการแสดงออกในระยะ เอ็มบริโอและระยะตัวอ่อนลาวาร์ จากการวิเคราะห์ด้วยกระบวนการ in situ hybridization แสดง ให้เห็นว่าสามารถพบ RNA ของ Mrvlg ในไซโทพลาสซึมของไข่ในระยะโอโอโกเนียม ระยะพรี วิทเทลโลเจนิก และระยะวิทเทลโลเจนิก นอกจากนี้ยังพบในนิวคลีโอพลาสซึมของไข่ในระยะที่ เจริญเต็มที่ ส่วนในอัณฑะของกุ้งตัวเต็มวัยพบการแสดงออกในไซโทพลาสซึมของสเปอร์มาโทโก เนียม และไพรมารีสเปอร์มาโทโกไซต์ และในนิวเคลียสของระยะเซกันดารีสเปอร์มาโทโกไซต์ และ สเปิร์ม ความคล้ายคลึงของลำดับกรดอะมิโน และการแสดงออกที่จำเพาะเจาะจงที่เซลล์ สืบพันธุ์ของกุ้งก้ามกราม แสดงให้เห็นว่า Mrvlg เป็นยีนที่ homology กับ vasa ยีนของ Drosophila เเละสามารถใช้เป็นยีนเครื่องหมายระดับโมเลกุลสำหรับเซลล์สืบพันธุ์ของกุ้งก้ามกราม

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Praneet Damrongphol

Role: Thesis Advisors

Created: 2007

Modified: 2553-06-17

Issued: 2010-06-10

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

CallNumber: TH L185c 2007

eng

DegreeName: Doctor of Philosophy

Level: Doctoral Degree

Descipline: Biology

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4537270.pdf	4.78 MB	7	2018-05-29 12:14:54

ใช้เวลา

0.310727 วินาที