Avian influenza virus recombinant protein ‪(H5N1)‬ : Immunogenicity

การศึกษาความสามารถในการกระตุ้นภูมิคุ้มกันของ Recombinant โปรตีนจากเชื้อไวรัสไข้หวัดนก

Name: Tananun Sihatrakul

MeSH: Influenza A Virus, H5N1 Subtype

MeSH: Immunogenetics

MeSH: Recombinant Proteins

Abstract: Influenza A virus causes infection in a variety of animal species including humans. The first outbreak of avian influenza (H5N1) virus in a human occurred in Hong Kong in 1997. As of Jan 2007, 270 cases of H5N1 infection in humans had been reported by the World Health Organization with a fatality rate of 60%. The recent outbreaks of avian influenza in humans have demonstrated the need for vaccine development. Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA), the envelope glycoproteins of the virus, are attractive vaccine candidates as they are major protective antigens and the process of production is safe. The study of the immunogenicity of the recombinant hemagglutinin and neuraminidase proteins in this study will provide useful information for further avian influenza vaccine development. Recombinant envelope proteins H5N1, 63 kDa of rHA5 and 55 kDa of rNA1, were successfully produced in prokaryotic system by using pBAD/His expression vector. The immunogenicity of rHA5 and rNA1 recombinant proteins were assessed in BALB/C mice. The antibody titer of 1:100 and 1:5 were chosen for use in comparison of immune response in immunized mice determined by Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) and Indirect Immunofluorescence Assay (IFA), respectively. The results demonstrated that rHA5 could induce significantly higher immune response than rNA1 (p<0.05). The result of microneutralization assay showed that the serum from both rHA5 and rNA1 immunized mice and showed low neutralizing antibody response at titer 1:50. This study showed that a specific antibody developed in animals immunized with rHA5 and rNA1 recombinant proteins has potential in activating neutralizing antibody and may be appropriate for further development of an avian influenza virus vaccine. The immunogenicity of rHA5 and rNA1 recombinant proteins produced in eukaryotic system and neutralizing epitope in these regions should be further studied. Moreover, the strain of the virus used in vaccine development should be accurately predicted because the neutralizing antibody has been reported to be subtype and strain specific.

Abstract: Influenza virus type A ทำให้เกิดการติดเชื้อในคนและสัตว์หลายชนิด มีการระบาดของไวรัสไข้หวัดนกชนิด H5N1 และมีการติดเชื้อในคน เป็นครั้งแรกในฮ่องกงในปี 2540 ในเดือนมกราคม 2550 องค์การอนามัยโลกรายงาน การติดเชื้อ H5N1 ในคนทั่วโลกเป็นจำนวน 270 ราย โดยมีอัตราการเสียชีวิต 60% การระบาดของโรคไข้หวัดนกทั่ว โลกทำให้เกิดความจำเป็นในการพัฒนาวัคซีน Hemagglutinin (HA) และ Nueraminidase (NA) ซึ่งเป็นโปรตีนส่วน เปลือก เป็นทางเลือกที่น่าสนใจในการพัฒนาเป็นวัคซีนเพราะมีบทบาทสำคัญในการกระตุ้นภูมิคุ้มกัน กระบวนการ ผลิตวัคซีนมีความปลอดภัย ดังนั้นการศึกษาในครั้งนี้เป็นการศึกษาการกระตุ้นภูมิคุ้มกันโดยใช้ recombinant protein ชนิด HA และ NA ผลจากการศึกษาในครั้งนี้สามารถนำไปใช้ในการพัฒนาการสร้างวัคซีนต่อไป Recombinant protein ชนิด HA5 (rHA5) ขนาด 63 kDA และ NA1 (rNA) ขนาด 55 kDAของไวรัสไข้หวัด นกได้ถูกผลิตใน prokaryotic system โดยใช้ pBAD/His expression vector ได้สำเร็จ การตอบสนองทางภูมิคุ้มกัน ของ recombinant protein ชนิด rHA5 และ rNA1 ที่ถูกผลิตขึ้นนั้นถูกทดสอบในหนูชนิด BALB/C antibody titer ที่ ระดับ1:100 และ 1:5 ถูกเลือกมาใช้ในการศึกษาเปรียบเทียบการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของหนูโดยวิธี Enzymelinked Immunosorbent Assay (ELISA) และ Indirected Immunofluorescence Assay (IFA) ตามลำดับ จาการศึกษา เปรียบเทียบการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันพบว่า rHA5 สามารถกระตุ้นระดับภูมิคุ้มกันได้ดีกว่า rNA1 อย่างมี นัยสำคัญทางสถิติ (p<0.05) ส่วนการตอบสนองของ neutralizing antibody ของหนูที่วัดด้วยวิธี neutralization assay พบว่ามีระดับต่ำที่ระดับ antibody titer 1:50 การศึกษาในครั้งนี้พบว่า recombinant protein ชนิด rHA5 และ rNA1 มีสามารถกระตุ้น neutralizing antibody ในสัตว์ทดลอง และอาจเหมาะสมเพื่อใช้ในการพัฒนาเป็นวัคซีนสำหรับไวรัสไข้หวัดนก โดยในอนาคต ควรมีการศึกษาการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของ recombinant protein ชนิด rHA5 และ rNA1 ใน eukaryotic system และการศึกษา epitope ส่วนที่กระตุ้นให้เกิดการสร้าง neutralizing antibody เพิ่มเติม รวมถึงการเลือกใช้ สายพันธุ์ ของไวรัสให้ถูกต้อง เนื่องจาก neutralizing antibody มีความจำเพาะต่อทั้งสัปทัยป์ และ สายพันธุ์

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Ruengpung Sutthent

Role: Thesis Advisors

Created: 2007

Modified: 2553-06-19

Issued: 2010-06-09

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

CallNumber: TH T161a 2007

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Microbiology

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4736626.pdf	1.71 MB	28	2023-12-14 09:40:55

ใช้เวลา

0.261099 วินาที