Development of a quantitative immunological test for detection of human IgE, IgG and IgG4 specific to house dust mite allergen

การพัฒนาวิธีการตรวจทางภูมิคุ้มกันวิทยาเพื่อตรวจหาปริมาณแอนติบอดีชนิด IgE, IgG และ IgG4 ที่จำเพาะต่อสารก่อภูมิแพ้ไรฝุ่นในซีรั่มผู้ป่วย

Name: Nopparut Keawhanam

LCSH: Immune response -- Mathematical models

MeSH: Dermatophagoides farinae

MeSH: Dermatophagoides pteronyssinus

MeSH: Enzyme-Linked Immunosorbent Assay

MeSH: Immunoglobulin G

Abstract: Allergic disease has increased as an important worldwide clinical problem. House dust mite (HDM) has been shown to be one of the most important and ubiquitous allergens involving in the pathogenesis of allergic disorders. The most dominant species that cause allergic disease are Dermatophagoides pteronyssinus (Dp) and Dermatophagoides farinae (Df). Among several mite allergens, Der p 1 and Der f 1 which are group 1 allergens of Dp and Df are strong immunogens that can stimulate the specific IgE production in allergic patients. The immune response to mite allergens have been studied in allergic disease and it has been found that IgE is regarded as the most important specific antibody, but other antibodies such as IgG and IgG4 have been reported to play some roles in allergic immune response. In the present study, an indirect ELISA for detection of specific IgE, IgG and IgG4 in sera of HDM allergic patients by using secretory antigen prepared from Dermatophagoides pteronyssinus (Dp crude extract) was developed and evaluated. The advantages of secretory antigens are that they are mimic antigens that contain high concentrations of group 1 allergens, As demonstrated by SDS-PAGE and double antibody sandwich ELISAs, large amount of antigen could be obtained relatively easily. The specific IgE, IgG and IgG4 in sera obtained from 47 house dust mite allergic patients and 20 normal subjects were determined by the developed ELISA and the results were evaluated by comparison with the reference method, CAP system. The results showed 66% sensitivity and 90% specificity for specific IgE. For specific IgG, the calculated sensitivity and specificity were 61% and 70.6%, respectively. For specific IgG4, the calculated sensitivity and specificity were 83.3% and 70 %, respectively. There was a significant correlation between specific IgE to Dp crude extract measured by CAP system and ELISA method (r = 0.688, p<0.001). There were significant differences of the specific IgE and IgG4 antibodies between the allergic group and the control group (p<0.05). Non significant differences in specific IgG antibodies were found between the allergic group and the control group (p>0.05). Thus, the developed ELISA will be useful for detection of a house dust mite specific antibody to patients’ sera.

Abstract: โรคภูมิแพ้จัดเป็นโรคที่มีความสำคัญและพบว่ามีอัตราการเพิ่มขึ้นของจำนวนผู้ป่วยมากขึ้นอย่างรวดเร็วและยังเป็น ปัญหาทั่วโลก ไรฝุ่นเป็นสารก่อโรคภูมิแพ้ที่มีความสำคัญที่สุดในการก่อโรคนี้ ไรฝุ่นที่พบว่าเป็นสาเหตุสำคัญในการ ก่อโรคทั่วโลกมีสองชนิด คือ Dermatophagoides pteronyssinus และ Dermatophagoides farinae และสารที่ก่อให้เกิด โรคภูมิแพ้มากที่สุดคือสารก่อภูมิแพ้ชนิดที่1 ของไรฝุ่นทั้งสองชนิด (Der p 1 และ Der f 1)โดยสารดังกล่าวพบได้ใน ทางเดินอาหารของไรและขี้ไรที่ปล่อยออกมาสะสมจำนวนมากในสิ่งแวดล้อมและคงสภาพความเป็นสารก่อโรคภูมิแพ้ ได้นานจึงสามารถที่จะกระตุ้นให้ระบบภูมิคุ้มกันของผู้ป่วยสร้างแอนติบอดีที่จำเพาะชนิด IgE ในปริมาณมาก นอกจากนั้นยังมีการศึกษาว่านอกจากร่างกายจะมีปฏิกิริยาตอบสนองโดยการสร้างแอนติบอดีที่จำเพาะชนิด IgE แล้ว ยังมีการสร้างแอนติบอดีชนิดอื่น ซึ่งได้แก่ แอนติบอดีชนิด IgG และ IgG4 ในการศึกษาครั้งนี้ได้พัฒนาวิธี indirect ELISA เพื่อตรวจหาแอนติบอดีที่จำเพาะชนิด IgE IgG และ IgG4 ในซีรั่มผู้ป่วยโรคภูมิแพ้ต่อไรฝุ่นโดยใช้แอนติเจนที่ เตรียมจาก Dermatophagoides pteronyssinus ซึ่งเป็น secretory antigen เนื่องจากแอนติเจนชนิดนี้มีปริมาณของสารก่อ ภูมิแพ้ชนิดที่ 1 (Der p 1) ในปริมาณที่สูงและเตรียมได้ในปริมาณมากและโดยวิธีง่ายๆที่สามารถเตรียมได้ใน ห้องปฏิบัติการทั่วไป ผลการวิเคราะห์โดย SDS-PAGE และการตรวจหาปริมาณ Der p 1 โดยวิธี double antibody sandwich ELISA พบว่าส่วนประกอบใหญ่ของแอนติเจนชนิดนี้คือสารก่อโรคภูมิแพ้ต่อไรฝุ่นชนิดที่ 1 ผลจากการ ตรวจโดยใช้วิธี indirect ELISA ที่พัฒนาขึ้นมากับซีรั่มของผู้ป่วยที่เป็นโรคภูมิแพ้ต่อไรฝุ่นจำนวน 47 รายและคนปกติ จำนวน 20 ราย การประเมินผลการตรวจโดยเทียบกับวิธีมาตรฐานในการตรวจ IgE จำเพาะโดยวิธี CAP system พบว่า ความไวสำหรับการตรวจหาแอนติบอดีจำเพาะชนิด IgE มีค่า 66% และความจำเพาะมีค่า 90% ค่าความไวสำหรับ แอนติบอดีจำเพาะชนิด IgG มีค่า 61.7% และความจำเพาะมีค่า 70.6% ค่าความไวสำหรับแอนติบอดีจำเพาะชนิด IgG4 มีค่า 83.3% และความจำเพาะมีค่า 70% ในการศึกษาครั้งนี้ได้มีการหาความสัมพันธ์ของวิธี ELISA ที่ได้พัฒนาขึ้นมา กับวิธี CAP System ซึ่งเป็นวิธีมาตรฐานที่ใช้ตรวจหาแอนติบอดีชนิด IgE ในปัจจุบัน พบว่าวิธี ELISA มีความสัมพันธ์ กับวิธีมาตรฐาน และได้ค่าความสัมพันธ์เท่ากับ 0.688 (p<0.001) ผลจากการเปรียบเทียบความแตกต่างผลตรวจหา แอนติบอดีจำเพาะชนิด IgEและIgG4 ในผู้ป่วยที่เป็นโรคภูมิแพ้ต่อไรฝุ่นและคนปกติ พบว่ามีความแตกต่างอย่างมี นัยสำคัญ (p<0.05) แต่ไม่พบความแตกต่างของผลตรวจหาแอนติบอดีจำเพาะชนิด IgGในผู้ป่วยที่เป็นโรคภูมิแพ้ต่อไร ฝุ่นและคนปกติ (p>0.05) ผลจากการศึกษาครั้งนี้พบว่าวิธีที่พัฒนาขึ้นนี้สามารถนำไปใช้ทดสอบหาปริมาณแอนติบอดี จำเพาะต่อไรฝุ่นในผู้ป่วยได้

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Sansnee Senawong

Role: Thesis Advisors

Created: 2007

Modified: 2553-06-18

Issued: 2010-06-09

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

CallNumber: TH N821d 2007

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Immunology

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4536747.pdf	587.24 KB	57	2020-05-21 16:13:53

ใช้เวลา

0.237143 วินาที