Investigation of coat protien and rnai tranformation strategies for protection of cantaloupe ‪(cucumis melo L. CV. sun lady )‬ from infection by prsv type W

การหาวิธีในการถ่ายทอดยีนโปรตีนเปลือกหุ้มและ RNAI เพื่อป้องกันแคนตาลูปจากการติดเชื้อไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอชนิด W

Name: Pongrit Krubphachaya

LCSH: Papaya ringspot virus

LCSH: Plants -- Virus resistance

MeSH: Capsid Proteins

MeSH: RNA, Small Interfering

MeSH: RNA Interference

Abstract: The coat protein and the HC-Pro genes of PRSV type W were used to transform into cantaloupe cultivar Sun Lady in order to confer their resistance to PRSV type W. Binary vectors containing the full length coat protein coding region under control of the 35S CaMV promoter (pSA1175), the inverted-repeat of a coat protein coding region (pSA1304) and the inverted-repeat of a HC-Pro coding region (pSA1325), were constructed and used for Agrobacterium–mediated transformation. No transgenic plant was obtained from transformation using pSA1325. Four independent transgenic lines were obtained using pSA1304 and one using pSA1175. Integration of the PRSV-W cp gene into the genome of these transgenic lines was verified by PCR amplification, GUS assays and Southern blot hybridization. In vitro inoculation of these lines with PRSV-W revealed that the line containing pSA1175 remained sensitive while the four lines containing pSA1304 were resistant. The presence of small RNA species corresponding to regions of the viral cp gene in transgenic lines resistant to PRSV-W supports the involvement of post-transcriptional gene silencing in the establishment of resistance

Abstract: ยีนโปรตีนเปลือกหุ้มและยีน HC-Pro ของไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอชนิด Wถูก นำมาใช้ในการถ่ายยีนเข้าสู่แตงแคลตาลูปสายพันธุ์ Sun Lady เพื่อสร้างพืชดัดแปรพันธุกรรมที่ ต้านทานต่อไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอชนิด W โดยการสร้างพลาสมิคที่มียีนโปรตีน เปลือกหุ้มของไวรัสเป็นแบบเต็มยีน(pSA1175) แบบกลับทิศซ้ำ (inverted-repeat) (pSA1304) และ ยีน HC-Pro แบบกลับทิศซ้ำ (pSA1325) ภายใต้การควบคุมการทำงานของ 35S CaMV promoter นำพลาสมิดเหล่านี้เข้าสู่ใบเลี้ยงของแคนตาลูปสายพันธุ์ Sun Lady โดยใช้เชื้อ Agrobacterium จาก การทดลองพบว่าในการถ่ายยีนด้วยพลาสมิด pSA1325 ไม่ได้พืชดัดแปรพันธุกรรม แต่จากการถ่ายยีน ด้วยพลาสมิด pSA1304 ได้พืชดัดแปรพันธุกรรม 4 สายพันธุ์ และการถ่ายยีนด้วย พลาสมิด pSA1175 ได้พืชดัดแปรพันธุกรรม 1 สายพันธุ์ ได้ทำการพิสูจน์ว่ามียีนโปรตีนเปลือกหุ้มของไวรัสโรคใบด่างจุ ดวงแหวนในมะละกอชนิด W อยู่ในสารพันธุกรรมของพืชดัดแปรพันธุกรรมที่ได้เหล่านี้โดยวิธีการ เพิ่มจำนวนสารพันธุกรรมด้วยเทคนิค PCR ตรวจสอบการแสดงออกของยีน GUS และวิธี Southern blot hybridization จากการปลูกเชื้อไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอชนิด W บนพืชดัดแปร พันธุกรรมเหล่านี้ในขวดทดลองพบว่า พืชดัดแปรพันธุกรรมทั้ง 4 สายพันธุ์ที่มี พลาสมิด pSA1304 อยู่ ต้านทานต่อเชื้อไวรัส ในขณะที่พืชดัดแปรพันธุกรรม 1 สายพันธุ์ที่มีพลาสมิด pSA1175 อยู่พบว่าไว ต่อเชื้อ การพบ small RNA ที่มีลำดับเบสตรงกับส่วนของยีนสร้างโปรตีนเปลือกหุ้มไวรัสในพืชดัด แปรพันธุกรรมที่ต้านทานต่อเชื้อไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอชนิด W แสดงให้เห็นว่า กระบวนการ post-transcriptional gene silencing เกี่ยวข้องกับกลไกการต้านทานต่อไวรัส

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Sunee Kertbundit

Role: Thesis Advisors

Created: 2007

Modified: 2553-06-23

Issued: 2010-06-08

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

CallNumber: TH P796i 2007

eng

DegreeName: Doctor of Philosophy

Level: Doctoral Degree

Descipline: Molecular Genetics and Genetic Engineering

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4437589.pdf	4.16 MB	51	2020-09-20 10:51:29

ใช้เวลา

-0.55138 วินาที