Analysis of crude and excretory-secretory antigens of Dirofilaria immitis adult worms against antibody of brugian filariasis by elisa and immunoblot

การวิเคราะห์แอนติเจนชนิดสกัดอย่างหยาบและชนิดสารคัดหลั่งจากพยาธิหัวใจสุนัขระยะตัวเต็มวัยต่อแอนติบอดีต่อโรคเท้าช้างชนิดบรูเกียนด้วยวิธี elisa และ immunoblot

Name: Panupong Sahaisook

LCSH: Dirofilaria immitis

LCSH: Filariasis -- Thailand

MeSH: Antigens

Abstract: Serodiagnosis of Brugian filariasis is not available in Thailand and a good test has not been demonstrated in the literature. Therefore, this study evaluated excretorysecretory antigens, either non-delipidized (NDLP) or delipidized (DLP) crude extracts from Dirofilaria immitis fresh and post-RPMI 1640 cultured adult worms, from which NDLP-fresh male and ether-DLP-fresh female crude extracts were subsequently selected by immunoblot test using pooled Brugian and negative sera to discriminate the unsatisfied extracts. IgG-ELISA analyzed male ES antigen (0.5 μg/ml), 1:800- diluted sera of Brugian filariasis (36 cases), other parasitic infections (181) and negative controls (54), and 1:8,000 dilution of IgG-conjugate. The test gave 100% sensitivity and 96.17% specificity at cut-off value 0.587. Only 8 cases of six parasitic infections (4.42%) and 1 negative control (1.85%) were false-positive. Under the above conditions, ES female antigen produced 100% sensitivity and 81.12% specificity at cut-off value 0.616. False positives were found in 37 cases of twenty parasitic infections (20.11%) and 8 negative controls (14.81%). For NDLP-fresh male antigen (2 μg/ml), serum dilution (1:1,600), and IgG-conjugate dilution (1:8,000), gave 88.89% sensitivity and 81.28% specificity, at cut-off value 0.233. The DLPfresh female antigen used the same conditions as the male crude antigen, except for IgG-conjugate at 1:16,000, resulting in 94.44% sensitivity and 76.17% specificity at cut-off value 0.164. Twenty parasitic infections showed false positives, 24.31% (44/181) and 30.94% (56/181) for crude male and female antigens, respectively. By immunoblot, only fresh male crude antigen showed an interesting glycoprotein band of 20.62 kDa, but it was inconsistent with Brugian filariasis sera and also cross-reacted with Bancroftian filariasis (5/5), gnathostomiasis (1/3), and angiostrongyliasis (1/3). It was concluded that ES male antigen can probably be used in the serodiagnosis of Brugian filariasis by IgG-ELISA, and male crude antigen may be used in detecting lymphatic filariasis by IgG-immunoblot. However, a purified antigen is needed for further study.

Abstract: การวินิจฉัยทางน้ำเหลืองของโรคเท้าช้างชนิดบรูเกียนในประเทศไทยยังไม่มีและวิธีตรวจวินิจฉัยที่ดีก็ยังไม่ เป็นที่แพร่หลายมากนักในวารสารงานวิจัย ดังนั้นจึงได้ทำการประเมินแอนติเจนชนิดสารคัดหลั่งและแอนติเจน ชนิดหยาบซึ่งอาจเป็นแบบไม่สกัดและแบบสกัดไขมันจากพยาธิหัวใจสุนัขเพศผู้ตัวสดและเพศเมียตัวสดและที่ เลี้ยงในอาหาร RPMI 1640 ต่อมาได้เลือกแอนติเจนชนิดหยาบแบบไม่สกัดไขมันจากพยาธิเพศผู้ตัวสดและแบบ สกัดไขมันจากพยาธิเพศเมียตัวสดมาใช้โดยผ่านการทดสอบด้วยวิธี immunoblot กับซีรั่มผู้ป่วยโรคเท้าช้างและ คนปกติเพื่อคัดแยกเอาแอนติเจนที่ดีไว้ เมื่อใช้วิธี IgG-ELISA วิเคราะห์แอนติเจนชนิดสารคัดหลั่งเพศผู้ (0.5 μg/ml) ซีรั่มเจือจาง 1:800 ของผู้ป่วยโรคเท้าช้างชนิดบรูเกียน(36 ราย) โรคติดเชื้อปรสิตชนิดอื่นๆ (181 ราย) และ ซีรั่มคนปกติ (54 ราย) และ IgG-conjugate เจือจางที่ 1:8,000 ผลพบว่าให้ค่าความไว 100% และค่าความจำเพาะ 96.17% ที่ค่าตัด 0.587 มีเพียง 8 รายจากโรคติดเชื้อปรสิต 6 โรค (4.42%) และ 1 รายจากซีรั่มคนปกติ (1.85%) ให้ ผลบวกปลอม จากสภาวะข้างต้นแอนติเจนชนิดสารคัดหลั่งเพศเมียให้ค่าความไว 100% และค่าความจำเพาะ 81.12% ที่ค่าตัด 0.616 พบผลบวกปลอม 37 รายจากโรคติดเชื้อปรสิต 20 โรค (20.11%) และ 8 รายจากซีรั่มคน ปกติ(14.81%) สำหรับแอนติเจนชนิดหยาบไม่สกัดไขมันจากพยาธิเพศผู้ (2 μg/ml) ซีรั่มที่ 1:1,600 และ IgGconjugate ที่ 1:8,000 ให้ค่าความไว 88.89% และค่าความจำเพาะ 81.28% ที่ค่าตัด 0.233 ส่วนแอนติเจนชนิด หยาบแบบสกัดไขมันจากพยาธิเพศเมียโดยใช้สภาวะทดสอบเหมือนกันยกเว้น IgG-conjugate เจือจางที่ 1:16,000 ให้ค่าความไว 94.44% และค่าความจำเพาะ 76.17% ที่ค่าตัด 0.164 มีโรคติดเชื้อปรสิต 20 โรคให้ผลบวกปลอม 24.31% (44/181) และ 30.94% (56/181) กับแอนติเจนชนิดหยาบจากพยาธิเพศผู้และเพศเมียตามลำดับ ส่วนผล immunoblot มีเพียงแอนติเจนชนิดหยาบจากพยาธิเพศผู้ตัวสดเท่านั้นที่ให้ไกลโคโปรตีนแอนติเจนที่น่าสนใจที่ 20.62 kDa แต่แถบนี้ไม่พบในผู้ป่วยโรคเท้าช้างชนิดบรูเกียนทั้งหมดและมีปฏิกิริยาข้ามกับโรคเท้าช้างชนิดแบนค รอฟเตียน (5/5) พยาธิตัวจี๊ด (1/3) และพยาธิปอดหนู (1/3) สรุปได้ว่าแอนติเจนชนิดสารคัดหลั่งเพศผู้น่าจะ นำมาใช้ในการวินิจฉัยทางน้ำเหลืองของโรคเท้าช้างชนิดบรูเกียนด้วยวิธี IgG-ELISA และแอนติเจนชนิดหยาบ เพศผู้อาจจะนำมาใช้ในการตรวจโรคเท้าช้างด้วยวิธี immunoblot อย่างไรก็ตามควรจะเตรียมแอนติเจนที่บริสุทธิ์ มาใช้ในการศึกษาขั้นต่อไป

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Saovanee Leelayoova

Role: Thesis Advisors

Created: 2007

Modified: 2553-06-22

Issued: 2010-06-08

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

CallNumber: TH P198a 2007

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Tropical Medicine

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4737008.pdf	1.54 MB	33	2022-01-29 00:13:57

ใช้เวลา

0.393132 วินาที