แจ้งเอกสารไม่ครบถ้วน, ไม่ตรงกับชื่อเรื่อง หรือมีข้อผิดพลาดเกี่ยวกับเอกสาร ติดต่อที่นี่ ==>
หากไม่มีอีเมลผู้รับให้กรอก thailis-noc@uni.net.th
หากไม่มีอีเมลผู้รับให้กรอก thailis-noc@uni.net.th
Sarinporn Visitsattapongse. Mutagenic analysis of loop residues critical for larvicidal activity of the Bacillus thuringiensis Cry4Ba Toxin . Master's Degree(Molecular Genetics and Genetic Engineering). Mahidol University. : Mahidol University, 2006.
Mutagenic analysis of loop residues critical for larvicidal activity of the Bacillus thuringiensis Cry4Ba Toxin
การเปลี่ยนแปลงยีนเพื่อศึกษากรดอะมิโนที่เกี่ยวข้องกับความเป็นพิษในบริเวณส่วนที่ 2 ของโปรตีนชนิด Cry4Ba จาก Bacillus thuringiensis
MeSH:
Bacillus thuringiensis
MeSH:
Immunohistochemistry
MeSH:
Mutagenesis
Abstract:
Previously, it has been demonstrated that S410 and E417 in the β8-β9 loop, and Y455
and N456 in the β10-β11 loop within domain II are essential in toxicity of the Bacillus
thuringiensis Cry4Ba mosquito-larvicidal protein. In this study, double mutations of E417 in the
β8-β9 loop (S410A/E417D, S410A/E417Q, S410A/E417R and S410A/E417Y), Y455 in the β10-
β11 loop (Y455E/N456A, Y455R/N456A, Y455F/N456A and Y455T/N456A) and N456 in the
β10-β11 loop (Y455A/N456D, Y455A/N456Q, Y455A/N456R and Y455A/N456Y) were
constructed via PCR-based mutagenesis. All double mutant toxins were overexpressed in
Escherichia coli as a 130-kDa protoxin at levels comparable to the wild-type toxin. Bioassays
against Stegomyia aegypti mosquito larvae revealed that E. coli cells that only express
S410A/E417D or Y455F/N456A mutant toxins could retain toxicity of 65% similar to the
single mutants (S410A and N456A). When Asn456 of the Y455A/N456A mutant was replaced
with Gln, Arg, Asp or Tyr, all the mutant toxins exhibited ca. 20% toxicity.
Immunohistochemical assays revealed that the S410A/E417D and Y455F/N456A toxins could
bind to S. aegypti larval midgut section at the apical microvilli of epithelial cells with a signal
similar to S410A and N456A template but lower than the wild-type Cry4Ba toxin. However,
the Y455A/N456Q toxin showed lower signal compared with the Y455A template and the
wild-type toxin. Altogether, the data suggested that a negatively charged residue at position
417, an aromatic residue at position 455 and a specific structure of asparagine at position 456
are essential in larvicidal activity of the Cry4Ba toxin.
Abstract:
การศึกษาก่อนหน้านี้พบว่ากรดอะมิโนในส่วนเชื่อมต่อระหว่าง β8-β9 (S410และ E417) และ
β10-β11(Y455 และ N456) ซึ่งอยู่ในส่วนที่ 2 ของโปรตีนฆ่าลูกน้ำยุงชนิด Cry4Ba มีความสำคัญกับ
การออกฤทธิ์ฆ่าลูกน้ำยุง ในการศึกษาครั้งนี้เป็นการศึกษาด้วยการแทนที่ทีละ 2 ตำแหน่ง โดยอาศัย
การเปลี่ยนแปลงยีนด้วยเทคนิค PCR ซึ่งพบว่าโปรตีนกลายพันธุ์ทั้งหมดซึ่งมีขนาด 130 kDa ได้
ถูกสร้างในแบคทีเรีย Escherichia coli ที่ระดับปริมาณใกล้เคียงกับ wild type และเมื่อทดสอบ
ความเป็นพิษต่อลูกน้ำยุงลาย(Stegomyia aegypti)พบว่าเฉพาะS410A/E417Dและ
Y455F/N456A เท่านั้นที่ออกฤทธิ์ฆ่าลูกน้ำยุงลดลงในระดับปริมาณเดียวกันกับโปรตีนกลายพันธุ์
ต้นแบบ (S410A และ N456A) ในส่วนของ N456 ของกรดอะมิโน Y455A/N456A ถูกแทนที่
ด้วย glutamine arginine aspartic acid และ tyrosine พบว่าโปรตีนกลายพันธุ์เหล่านี้แสดงความ
เป็นพิษลดลงอย่างชัดเจนเมื่อเปรียบเทียบกับ ต้นแบบ Y455A จากการวิเคราะห์ผลการทดลองใน
ครั้งนี้จึงได้เสนอว่า โครงสร้างของ negatively charged และ aromatic ในส่วน side chain ของ
E417 และ Y455 รวมทั้งโครงสร้างของกรดอะมิโน asparagine ที่ตำแหน่ง N456 มีความสำคัญกับ
การออกฤทธิ์ฆ่าลูกน้ำ นอกจากนี้เมื่อใช้วิธี immunohistochemistry โดยอาศัย monoclonal
antibody ที่จำเพาะพบว่าโปรตีนกลายพันธุ์ชนิด S410A/E417DและY455F/N456A สามารถจับ
กับส่วนบนสุดของเซลล์บุผิวของกระเพาะลูกน้ำยุงลายได้ในปริมาณที่ใกล้เคียงกันกับต้นแบบ
(S410AและN456A) ส่วน Y455A/N456Q จะได้ปริมาณที่ลดลงเมื่อเทียบกับต้นแบบ (Y455A)
โดยสรุปของการศึกษานี้พบว่าโครงสร้าง negatively charged ที่ตำแหน่ง 417 และ aromatic ที่
ตำแหน่ง 455 รวมทั้งโครงสร้างที่จำเพาะเจาะจงของ asparagine ที่ตำแหน่ง 456 นั้นมีความสำคัญ
เกี่ยวข้องกับความเป็นพิษของโปรตีน Cry4Ba
Mahidol University
Address:
NAKHON PATHOM
Email:
liwww@mahidol.ac.th
Name: Chanan Angsuthanasombat
Role:
Thesis Advisors
Created:
2006
Modified:
2553-06-24
Issued:
2010-06-06
วิทยานิพนธ์/Thesis
application/pdf
ISBN:
9740478425
CallNumber:
TH S245m 2006
eng
DegreeName: Master of Science
Level: Master's Degree
Descipline: Molecular Genetics and Genetic Engineering
Grantor: Mahidol University
©copyrights Mahidol University
RightsAccess:
ใช้เวลา
0.442632 วินาที
Sarinporn Visitsattapongse
| Title | Contributor | Type |
|---|---|---|
| Mutagenic analysis of loop residues critical for larvicidal activity of the Bacillus thuringiensis Cry4Ba Toxin
มหาวิทยาลัยมหิดล Sarinporn Visitsattapongse | Chanan Angsuthanasombat | วิทยานิพนธ์/Thesis |
| Functional characterization of charged residues in the B10-B11 receptor-binding loop of Bacillus thuringiensis Cry4Aa and Cry4Ba Toxins
มหาวิทยาลัยมหิดล Sarinporn Visitsattapongse. | Chanan Angsuthanasombat Chamras Promptmas Chalermpol Kanchanawarin | วิทยานิพนธ์/Thesis |
Chanan Angsuthanasombat