In vitro drug sensitivity of Plasmodium vivax to chloroquine using microscopic, isotopic and picogreen assays

การทดสอบความไวของเชื้อ Plasmodium vivax ต่อยา Chloroquine ในหลอดทดลอง โดยวิธีการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ วิธี Isotopic และวิธี Picogreen

Name: Varakorn Kosaisavee

MeSH: Chloroquine

MeSH: Microscopes

MeSH: Plasmodium vivax

Abstract: Malaria remains an important disease in Thailand. This study was carried out in Mae Sod, located in the Thai province of Tak which borders Myanmar. The study population was composed of Karen and Burmese peoples. The general objective of this study was to determine the most useful in vitro drug sensitivity method to measure the development of Plasmodium vivax under chloroquine drug pressure. The five objectives of this project were studied from June 2004 to October 2004. Forty isolates of P. vivax were selected from symptomatic malaria patients by Shoklo Malaria Research Unit (SMRU). A Blood Media Mixture (BMM) containing the P. vivax isolates were loaded onto 96 well plates that were predosed with serial dilutions of chloroquine at 37oC for 48 hrs. All blood samples that were tested, indicated 100% sensitivity to chloroquine when compared with P. vivax isolates from Indonesia. The mean 50% inhibitory concentration (IC50) from Thailand P. vivax isolates was 36 ng/ml, while that from Indonesia P. vivax isolates was 122.9 ng/ml. The comparison between fresh and cryopreserved P. vivax isolates showed no significant difference in the mean IC50 response. Cryopreserved P. vivax isolates were useful for IC50 data. The comparison of data from the microscopic, isotopic and PicoGreen drug sensitivity assays showed no significant difference in the mean IC50 for the P.vivax tested (P = 0.788). Although the mean IC50 in this study was less than previous studies on Thailand-Myanmar border, the P. vivax isolates are regarded to be chloroquine sensitive. Although the isotopic and PicoGreen assays are easy and fast to read, the microscopic assay had the highest success rate. The less sensitive isotopic and PicoGreen assays are more suited to Plasmodium falciparum applications because this species has a higher maturation and reproductive rate. The modified microscopic assay is a practical, accurate and relatively inexpensive assay to determine the drug sensitivity of P.vivax in Thailand. Furthermore it can also be applied in evaluating the likelihood of any hypothesized network

Abstract: โรคมาลาเรียยังคงเป็นปัญหาสาธารณสุขที่สำคัญของประเทศไทยแถบชายแดนไทยพม่า และ ชายแดนไทยกัมพูชา พื้นที่ที่ทำการศึกษาในครั้งนี้คืออำเภอแม่สอด จังหวัดตาก ซึ่งเป็นเป็นเขตชายแดน ไทยพม่า ประชากรส่วนใหญ่เป็นชาวกะเหรี่ยง และพม่า การวิจัยครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษา เปรียบเทียบวิธีการทดสอบความไวของเชื้อ Plasmodium vivax ต่อยา chloroquine ในหลอดทดลอง โดยวิธีการตรวจสอบโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ การติดฉลากด้วยสารรังสี และการย้อมด้วยสี PicoGreen โดยเก็บตัวอย่างเลือดจากผู้ป่วยที่มีอาการของโรคมาลาเรีย โดย Shoklo Malaria Research Unit (SMRU) จำนวน 40 ตัวอย่าง ตั้งแต่เดือนมิถุนายนถึงเดือนตุลาคม 2547 เมื่อนำเลือดผู้ป่วยที่เก็บมา เลี้ยงเชื้อในถาดที่มียา chloroquine เคลือบอยู่ที่ระดับความเข้มข้นแตกต่างกันที่อุณหภูมิ 37oC ใช้เวลา ประมาณ 48 ชั่วโมง เมื่อนำมาตรวจสอบโดยทั้ง 3 วิธี พบว่า 100 % ของเชื้อ P. vivax isolates ใน การศึกษาในครั้งนี้ (IC50 = 36 ng/ml) ยังคงตอบสนองต่อยา chloroquine เมื่อเปรียบเทียบกับเชื้อ P. vivax isolates ใน Indonesia (IC50 = 122.9 ng/ml) (P < 0.001) เมื่อเปรียบเทียบผลจากการใช้เลือด ผู้ป่วยและเลือดผู้ป่วยที่เก็บรักษาไว้ที่ -20oC นานประมาณ 3 เดือนพบว่าให้ผลไม่แตกต่างกัน (P= 0.34) โดยเลือดที่เก็บไว้ที่ -20 o C สามารถนำมาใช้หาค่า IC50 ได้ และจากการเปรียบเทียบทั้ง 3 วิธี พบว่ามีค่า IC50 ไม่แตกต่างกัน (P = 0.788) แม้ว่าค่า IC50 ที่ได้จากการศึกษาในครั้งนี้มีค่าน้อยกว่า ค่าที่ได้จากการศึกษาในบริเวณเดียวกันนี้ อย่างไรก็ตามเชื้อ P. vivax ในประเทศไทยก็ยังคงตอบสนอง ต่อยา chloroquine แม้ว่าวิธี isotopic และ PicoGreen จะเป็นวิธีที่เร็วและง่ายต่อการอ่านผลแต่วิธี microscopic ก็ยังคงมีอัตราความสำเร็จ (success rate) สูงที่สุด วิธี isotopic และ PicoGreen เหมาะ สำหรับเชื้อ P. falciparum clones เพราะเชื้อชนิดนี้มีอัตราการเจริญ (reproductive rate) สูง ดังนั้น วิธีที่เหมาะสำหรับใช้ในทดสอบความไวของเชื้อ P. vivax ในประเทศไทยคือการตรวจด้วยกล้อง จุลทรรศน์ เนื่องจากเป็นวิธีที่ปฏิบัติง่าย ได้ผลถูกต้องและเสียค่าใช่จ่ายน้อยกว่าวิธีอื่น และวิธีนี้ยัง สามารถประยุกต์ใช้ได้เหมือนกับงานวิจัยอื่นๆเช่นเดียวกัน

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Ura Lek-Uthai

Role: Thesis Advisors

Created: 2005

Modified: 2553-05-11

Issued: 2010-03-22

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

ISBN: 9740455875

CallNumber: TH V287i 2005

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Infectious Diseases and Epidemiology

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4636817.pdf	2.6 MB	18	2021-05-23 05:19:03

ใช้เวลา

0.218286 วินาที