PCR diagnosis of amoebiasis

การตรวจวินิจฉัยโรคบิดอะมีบาโดยใช้เทคนิคพีซีอาร์

Name: Chanthanee Nitigaroon

MeSH: Amebiasis -- diagnosis

MeSH: Polymerase Chain Reaction

Abstract: The ability to differentiate the two similar intestinal protozoa, Entamoeba histolytica and Entamoeba dispar, would be beneficial in clinical diagnosis. PCRbased assay was used for greater efficiency with a more reliable outcome. Use of the QIAamp DNA extraction was evaluated in 30 unpreserved stools from Thai patients whose stools were suspected of E. histolytica/E. dispar infections and reported positive by microscopy. Two pairs of primers, E1 and E2, and N14 and N15, were designed based on the SSU-rRNA gene sequences of E. histolytica and E. dispar. The former pairs liberated the 1,080 bp amplicon, specific for the genus Entamoeba, and the latter pairs liberated the 330 bp amplicon, differentiating E. dispar from E. histolytica. Six of thirty faecal samples suspected of E. histolytica/E. dispar infections were culture-positive. Of the 30 unpreserved stools, 11 and 17 were positive with E1 and E2, N14 and N15 primer pairs, respectively and when the culture method was used as the gold standard, primer E1 and E2 revealed a specificity and efficacy of 79.2 and 83.3%, respectively, while primer N14 and N15 revealed a specificity and efficacy of 54.2 and 63.3%, respectively. Both primer sets provided 100% sensitivity in detecting Entamoeba species without any cross reactivity with other parasites and bacteria. However, RFLP of 1,080 bp PCR products amplified by primer E1 and E2, and digested with AluI, showed one prominent band of <50 bp only in E. dispar. RFLP analysis of the 1,080 bp amplicon revealed some polymorphism, while the 330 bp amplicon was conserved. The advantage of this method is its use in clinical diagnosis, epidemiology and in decreasing the overuse of drugs.

Abstract: โรคบิดอะมีบาเกิดจากการติดเชื้อปรสิต Entamoeba histolytica ซึ่งตรวจหาเชื้อใน อุจจาระผู้ป่วยด้วยกล้องจุลทรรศน์ ได้ง่าย แต่ไม่สามารถแยกชนิดระหว่าง E. histolytica ซึ่งก่อ โรคกับ E. disparซึ่งไม่ก่อโรคได้ หากสามารถแยกเชื้อ 2 ชนิดนี้ได้จะเป็นประโยชน์ในการวินิจฉัย และการรักษาโรค จึงได้พัฒนาใช้เทคนิคพีซีอาร์ซึ่งมีความจำเพาะสูง ประหยัดเวลาและลดขั้นตอน ในการวินิจฉัยอุจจาระผู้ป่วยไทย 30 ราย ที่พบเชื้อ E. histolytica/ E. dispar ด้วยกล้องจุลทรรศน์ อุจจาระที่ติดเชื้ออื่น 24 รายและอุจจาระจากคนปกติ 10 ราย การสกัด DNA ใช้ QIAamp และออก แบบ primer 2 คู่จากยีน SSU-rRNA ของ E. histolytica และ E. dispar สำหรับ primer คู่ที่ 1 คือ E1 และ E2 ออกแบบให้มีความจำเพาะต่อ Genus Entamoeba ซึ่งให้ผลผลิตขนาด 1,080 คู่ เบส ส่วน primer คู่ที่ 2 คือ N14 และ N15 ออกแบบเพื่อใช้ตรวจแยก E. dispar ออกจาก E. histolytica ซึ่งให้ผลผลิตขนาด 330 คู่เบส สามารถเพาะเชื้อขึ้น 6 รายจากสิ่งส่งตรวจทั้ง 30 ราย และให้ผลผลิต 11 รายในการทดสอบด้วยพีซีอาร์โดยใช้ primer E1 และ E2 และให้ผลผลิต 17 ราย ในการทดสอบด้วยพีซีอาร์โดยใช้ primer N14 และ N15 ผลการทดลองพบว่า primers ทั้ง 2 คู่คือ E1 และ E2/ N14 และ N15 ตรวจได้จำเพาะต่อ Genus Entamoeba เท่านั้นโดยมีความไว ร้อยละ 100 เท่ากันโดยไม่ทำปฏิกิริยาข้ามพวก จากนี้จึงใช้เทคนิค RFLP ตัดด้วย AluI เพื่อแยก species โดย 1,080 คู่เบสแสดงความหลากหลายของแถบยีนและให้ผลผลิตขนาด 50 คู่เบสใน E. dispar เท่านั้นส่วน 330 คู่เบสให้แถบที่จำเพาะของยีน หากใช้เทคนิคการเพาะเชื้อเป็นวิธีมาตรฐาน และนำมาเปรียบเทียบกับผลพีซีอาร์แล้ว primer E1 และ E2/primer N14 และ N15 ให้ค่าความ จำเพาะร้อยละ 79.2, 54.2 และค่าประสิทธิผลร้อยละ 83.3, 63.3 ตามลำดับ ผลการทดลองนี้เป็น ประโยชน์ในการวินิจฉัยโรค ด้านระบาดวิทยาและช่วยลดขนาดของการใช้ยาในการรักษา

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Nitaya Thammapalerd

Role: Thesis Advisors

Created: 2004

Modified: 2553-06-26

Issued: 2010-02-19

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

ISBN: 9740452396

CallNumber: TH C459pc 2004

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Tropical Medicine

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4537214.pdf	1.07 MB	73	2025-11-28 19:06:27

ใช้เวลา

-0.626894 วินาที