The effect of CD8+ T lymphocytes on the replication of HIV-1 subtypes B and E in Thai donor cells

ผลของเซลล์ชนิดซีดี 8 ที่มีต่อการเจริญเติบโตของเชื้อเอชไอวี-1 ชนิดย่อยบีและอีในเซลล์เม็ดเลือดขาวของคนไทย

Name: Ronnarit Haponsaph

MeSH: Acquired Immunodeficiency Syndrome

LCSH: AIDS (Disease) -- Thailand

LCSH: HIV infections -- Thailand

Abstract: Differences in HLA type and in the immunophenotype of lymphocyte subsetshave been reported for Thais versus North Americans. These factors may play a rolein the replication and pathogenesis of HIV in different ethnic groups. The objectivesof this study were to determine the growth kinetics of HIV subtype B and CRF01_AE(E) in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from HIV seronegative Thaidonors, to determine the relationship between MHC serotype and growth kinetics ofHIV subtype B and E isolates in Thai donors, and to investigate whether Thai donorCD8+ cells can be infected with HIV-1 in vitro. Donor PBMC were prepared from whole blood samples of Thai subjects usingficoll-hypaque gradient centrifugation; cells were also cryopreserved for use inmultiple experiments. Cells were thawed and immunophenotyped for CD3, CD4 andCD8 using a Becton Dickinson FACSort flow cytometer. T and B cells were isolatedfrom PBMC for HLA class I and II typing, respectively.The CD4+ cells weredepleted from a portion of the PBMC by immunomagnetic bead selection (Dynal,Inc.). PBMC or CD8-enriched PBMC were stimulated with phytohemagglutinin(PHA) for 24 hrs and cultured with interleukin-2 (IL-2). After 4 days, cells wereimmunophenotyped again and infected with varying doses of virus. At days 4, 7 and10 supernatant was harvested for extracellular p24 quantitation by antigen captureELISA, and cells were harvested for intracellular p24 determination by flowcytometry. As previously reported for North American donors, variation in the susceptibilityto HIV-1 infection was observed amongst Thai donors. For example, donorNORM025 was highly susceptible to HIV-1 infection, while donor NORM027showed minimal infection. The level of infection was, in part, related to the % CD8+cells in the PBMC, as donor NORM027 had 70% CD8s, while donor NORM025 had35% CD8s. However MHC phenotypes for slow and rapid progression seemed to beunrelated to donor susceptibility to HIV-1 infection in vitro. In donor NORM025,1%-2% of the CD8+ cells were p24+, and only a subset of these infected cells wereCD4+/CD8+. In conclusion, our findings showed that CD8-enriched PBMC could beinfected with HIV-1 and that CD8+ T cells, as well as other factors, may influenceHIV replication in cells from Thai donors.

Abstract: ความแตกต่างของเอชแอลเอ และ ชนิดย่อยของเม็ดเลือดขาวได้ถูกรายงานในคนไทยและคนอเมริกัน องค์ประกอบเหล่านี้อาจมีบทบาทสำคัญในการแบ่งตัวและพยาธิกำเนิดของเชื้อเอชไอวีในคนต่างเชื้อชาติกัน วัตถุประสงค์ของงานวิจัยนี้เพื่อศึกษาการเจริญเติบโตของเชื้อเอชไอวีชนิดย่อยบีและ CRF01_AE (อี) ในเซลล์โมโนนิวเคลียร์ที่ได้จากคนไทยที่ไม่ติดเชื้อเอชไอวี เพื่อศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างเอชแอลเอ ซีโรไทป์ และการเจริญเติบโตของเชื้อเอชไอวีชนิดย่อยบีและอีในคนไทย และเพื่อศึกษาว่าเซลล์ซีดี 8 ของคนไทยสามารถติดเชื้อเอชไอวีในหลอดทดลองได้หรือไม่ เซลโมโนนิวเคลียร์ถูกเตรียมจากตัวอย่างเลือดของคนไทยโดยใช้ไฟคอลไฮเปคกราเดี้ยนเซนติฟิวเกชั่นเซลล์ที่ได้ถูกแช่แข็งเพื่อเก็บไว้ใช้ในการทดลองขั้นต่อมา โดยการละลาย และตรวจหาซีดี 3, ซีดี 4 และ ซีดี 8โดยใช้โฟลไซโตเมตรีของบริษัทเบคตันดิคคินสัน ทีและบีเซลล์ได้ถูกแยกจากเซลล์โมโนนิวเคลียร์เพื่อหาเอชแอลเอชนิด 1 และ 2 ตามลำดับ เซลล์ซีดี 4ได้ถูกกำจัดจากเซลล์โมโนนิวเคลียร์โดยใช้เม็ดบีดที่เคลือบด้วยแอนติบอดี้จากบริษัทไดนัล เซลโมโนนิวเคลียร์และเซลล์ซีดี 8 ได้ถูกกระตุ้นด้วยไฟโตฮีแมคกลูตินิน เป็นเวลา 24 ชั่วโมงและถูกเลี้ยงต่อในอาหารที่มีไอแอล 2 (IL-2) หลังจากนั้น 4 วัน เซลล์ได้ถูกตรวจหาชนิดย่อยของเม็ดเลือดขาวอีกครั้งและถูกทำให้ติดเชื้อไวรัสด้วยขนาดต่างๆกัน ที่วันที่ 4, 7 และ 10 ส่วนน้ำใสที่ได้จากการเลี้ยงเชื้อไวรัสได้ถูกเก็บไว้เพื่อตรวจหา พี24 โดยวิธีอีไลซ่าและเซลล์ได้ถูกเก็บไว้เพื่อตรวจหา พี24 ภายในเซลล์โดยวิธีโฟลไซโตเมตรี เหมือนเช่นที่ได้ถูกรายงานไว้ในคนอเมริกัน ความแตกต่างในความไวของการติดเชื้อเอชไอวีวัน ก็พบในคนไทยด้วย ตัวอย่างเช่น NORM025 มีความไวสูงมากในการติดเชื้อเอชไอวี-1 ขณะที่ NORM027 มีการติดเชื้อต่ำที่สุด ระดับของการติดเชื้อบางส่วนมีความสัมพันธ์กับเปอร์เซ็นต์เซลล์ซีดี 8 ในเซลล์โมโนนิวเคลียร์ เช่นNORM027 มีซีดี 8 70 เปอร์เซ็นต์ ขณะที่ NORM025 มีซีดี 8 35 เปอร์เซ็นต์ อย่างไรก็ตามชนิดของเอ็มเอชซี ฟีโนไทป์ที่พบในคนที่มีการดำเนินโรคช้าและเร็วไม่มีความสัมพันธ์ต่อความไวของการติดเชื้อเอชไอวีของเซลล์คนไทยในหลอดทดลอง ใน NORM025 1 ถึง 2 เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ซีดี 8 มีพี24 และบางส่วนของเซลล์ติดเชื้อเหล่านี้เป็นเซลล์ที่มีทั้งซีดี 4 และซีดี 8 การค้นพบของเราแสดงให้เห็นว่าเซลล์ซีดี 8 และองค์ประกอบอื่นๆ อาจมีอิทธิพลต่อการแบ่งตัวของเชื้อเอชไอวี ในเซลล์ของคนไทย นอกจากนี้เซลล์ซีดี 8 ของคนไทยสามารถถูกทำให้ติดเชื้อในหลอดทดลองด้วยเชื้อเอชไอวี-1

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Kovit Pattanapanyasat

Role: Thesis Advisors

Created: 2003

Modified: 2553-03-11

Issued: 2010-01-28

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

ISBN: 9740438474

CallNumber: TH R773e 2003

eng

DegreeName: Doctor of Philosophy

Level: Doctoral Degree

Descipline: Immunology

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4136528.pdf	3.04 MB	7	2024-10-04 20:08:20

ใช้เวลา

-0.567883 วินาที