Production and characterization of monoclonal antibodies specific to Leptospira interrogans and their applications

การผลิตและศึกษาคุณสมบัติของโมโนโคลนัลแอนติบอดีจำเพาะต่อจุลชีพ L.interrogans และการนำไปประยุกต์ใช้

Name: Patchanee Chootong

MeSH: Antibodies, Monoclonal

MeSH: Latex Fixation Tests

MeSH: Leptospira interrogans

LCSH: Identification

Abstract: Serogroup/serovar, broadly reactive, and genus specific monoclonal antibodies were produced by immunizing BALB/c mice with whole cell antigens prepared from L. interrogans serovar Cynopteri and Ranarum. The specificity of the produced monoclonal antibodies were tested by an indirect ELISA, using panel antigens prepared from 20 serovars of pathogenic, a saprophytic leptospires and 9 genera of the other bacteria. One monoclonal antibody, 2B3A8, reacted only with L. interrogans serogroup/serovar Cynopteri and another monoclonal antibody, 8C1E11, reacted only with L. interrogans serogroup/serovar Ranarum. The genus specific MAb, 6B2A8, reacted with all leptospiral serovar in panel antigens. The broadly reactive monoclonal antibody, 7A5F12, reacted with 13 serovars of pathogenic L. interrogans. The isotypes of the monoclonal antibodies 2B3A8, 6B2A8, 7A5F12 and 8C1E11 are IgG3κ, IgMκ, IgG2bκ, and IgMκ, respectively. Western blot staining of whole cell antigen prepared from serovar Cynopteri or Ranarum revealed that the 2B3A8, 6B2A8 and 8C1E11 MAbs recognized carbohydrate epitopes which presented as a diffuse band of MW varying from 26.00-29.00, 20.50-23.50 and 20.50- 24.75 Kda, respectively. The 7A5F12 MAb recognized the protein epitope at MW 38 Kda. To identify the L. interrogans serogroup/serovar Cynopteri or Ranarum, the serovar specific MAbs, 2B3A8 and 8C1E11 were used for development the latex agglutination test. The specificity of latex reagent was studied by using panel antigens prepared from 21 pathogenic and one saprophytic leptospiral serovars. The 2B3A8 latex reagent agglutinated only with L. interrogans serovar Cynopteri. The 8C1E11 latex reagent agglutinated with L. interrogans serovar Canicola, Ranarum and Tarrasovi. The sensitivity of latex agglutination test was evaluated by using the homologous viable antigen. The minimum bacteria number that can be agglutinated with the 2B3A8 and 8C1E11 latex reagents were 4.5 x 105 or 6.0x 105 leptospires/ml, respectively. These latex reagents will be very useful for rapid identification of L. interrogans serovar Cynopteri and Ranarum

Abstract: การศึกษาในครั้งนี้ผู้วิจัยได้ทำการผลิตโมโนโคลนัลแอนติบอดีที่มีความจำเพาะต่อจุลชีพ L. interrogansโดยใช้ แอนติเจนชนิด whole cell ที่เตรียมจาก L. interrogans serovar Cynopteri และ Ranarum ฉีดหนู BALB/c โมโนโคลนัลแอนติบอดีที่ผลิตได้นำมาทำการตรวจคุณสมบัติโดยวิธี indirect enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) โดยใช้แอนติเจนที่เตรียมจากจุลชีพเลปโตสไปราก่อโรค 20 serovars จุลชีพ ที่ไม่ก่อโรค1 serovar และแบคทีเรียอื่นๆอีก 9 ชนิด พบว่าสามารถแบ่งโมโนโคลนัลแอนติบอดีออกเป็น 4 กลุ่มตามคุณสมบัติ ความจำเพาะได้แก่โมโนโคลนัลแอนติบอดี 2B3A8 จำเพาะต่อ L. interrogans serogroup/serovar Cynopteri ส่วนโมโนโคลนัลแอนติบอดี 8C1E11จำเพาะต่อ L. interrogans serogroup/serovar Ranarum โมโนโคลนัลแอนติบอดี 6B2A8 จำเพาะต่อจุลชีพเลปโตสไปราทุก serovars ที่นำทดสอบ โมโนโคลนัล แอนติบอดี 7A5F12 มีความจำเพาะต่อ จุลชีพเลปโตสไปราก่อโรค 13 serovars เมื่อทำการศึกษา isotypes ของโมโน โคลนัลแอนติบอดี 2B3A8, 6B2A8, 7A5F12 และ 8C1E11พบว่ามี isotypes เป็นชนิด IgG3κ, IgMκ, IgG2bκ, IgMκ ตามลำดับ สำหรับคุณสมบัติของ epitopes ที่จำเพาะต่อโมโนโคลนัลแอนติบอดี ได้ทำการศึกษาโดยวิธี Western blot โดยใช้ whole cell antigen ที่เตรียมจาก serovar Cynopteri หรือ Ranarum จากการ ศึกษาพบว่าโมโนโคลนัลแอนติบอดี 2B3A8, 6B2A8 และ 8C1E11 จำเพาะต่อ epitopes ที่มีคุณสมบัติเป็น คาร์โบไฮเดรตซึ่งมีน้ำหนักโมเลกุลอยู่ในช่วง 26.00-29.00, 20.50-23.50 และ 20.50-24.75 กิโลดาลตันตาม ลำดับ ในขณะที่โมโนโคลนัลแอนติบอดี 7A5F12 จำเพาะต่อ epitopes ที่มีคุณสมบัติเป็นโปรตีนซึ่งมีน้ำหนักโมเลกุล 38 กิโลดาลตัน โมโนโคลนัลแอนติบอดี 2B3A8 และ 8C1E11 ได้นำมาประยุกต์ใช้สำหรับพัฒนา latex agglutination test เพื่อใช้ในการบ่งชี้ serogroup/serovar ของจุลชีพ L. interrogans สำหรับความจำเพาะของน้ำยา latex ได้ ทำการศึกษาโดยทดสอบกับแอนติเจนเชื้อเป็นที่เตรียมจากจุลชีพเลปโตสไปราก่อโรค 20 serovars และจุลชีพไม่ก่อโรค 1 serovar ผลการศึกษาพบว่าน้ำยาlatexที่เตรียมโดยใช้โมโนโคลนัลแอนติบอดี2B3A8จำเพาะต่อ serogroup/serovar Cynopteri เท่านั้นส่วนน้ำยา latex 8C1E11จำเพาะต่อ serogroup/serovar Canicola, Ranarum และ Tarrasovi จากนั้นได้ทำการทดสอบความไวของปฏิกิริยาเกาะกลุ่มด้วยน้ำยา latexโดยทดสอบกับแอนติเจนเชื้อเป็นที่เตรียม จาก serovar Cynopteri หรือ Ranarum พบว่าจำนวนจุลชีพที่น้อยที่สุดที่สามารถทำปฏิกิริยากับน้ำยา latex 2B3A8 และ 8C1E11 คือ 4.5x 105 และ 6.0x105 leptospires/ml ตามลำดับ น้ำยา latex ที่ผลิตได้ในการ ศึกษาครั้งนี้จะเป็นประโยชน์อย่างมากในการบ่งชี้ L. interrogans serovar Cynopteri และ Ranarum

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Pattama Ekpo

Role: Thesis Advisors

Created: 2004

Modified: 2553-03-11

Issued: 2010-01-26

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

ISBN: 9740442382

CallNumber: TH P294p 2004

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Immunology

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4436233.pdf	740.93 KB	14	2019-08-05 18:48:22

ใช้เวลา

0.280793 วินาที