Detection of Entamoeba Histolytica antigen using polyclonal antibody dot-blot ELISA

การวินิจฉัยเชื้อ Entamoeba Histolytica โดยใช้ polyclonal antibody ด้วยวิธี dot-blot ELISA

Name: Benjawan Saivijitr

MeSH: Antibodies -- immunology

MeSH: Antigens

MeSH: Entamoeba histolytica

MeSH: Enzyme-Linked Immunosorbent Assay

MeSH: Antigen-Antibody Reactions -- immunology

MeSH: Immunoblotting

Abstract: The study was designed to perform Dot-blot ELISA for detection of Entamoeba histolytica antigen from stools and serum antibody of amoebic patients. The crude antigen was extracted from axenic culture of Entamoeba histolytica, HK-9 strain, to detect serum IgG antibodies against Entamoeba histolytica and polyclonal antibody was used to detect Entamoeba histolytica antigen in the stools from amoebic patients, by dot-blot ELISA. The assays were applied to detect both antibody and antigen in serum and stool samples of 220 individuals, respectively. The samples were divided into three groups: group 1 comprised 120 confirmed individuals whose stools were positive only for Entamoeba histolytica cysts and/or trophozoite; group 2 was comprised of 50 individuals whose stools were negative for Entamoeba histolytica but contained other intestinal parasites such as Entamoeba coli, Entamoeba hartmanni, Endolimax nana, Giardia lamblia, Strongyloides stercoralis and Ascaris lumbricoides; and group 3 consisted of 50 healthy individuals whose stools were free from other intestinal parasites. The results of Dot-blot ELISA assay were detected based on colors of the reaction which were recorded as follows: three plus positive (+++), two plus positive (++), one plus positive (+) and negative (-). In group 1, serum antibody of amoebic patients found positive as three plus positive (+++), two plus positive (++) and one plus positive (+) were 10, 22, and 15 of 120 cases, respectively. Among 50 cases in group 2 (other intestinal parasitic infection), there were two plus positive (++) in 4 out of 50. The two plus positive (++) and the one plus positive (+) were detected in 1 and 4 out of 50 for group 3. For the Dot-blot ELISA assays using polyclonal antibody to detect Entamoeba histolytica antigen in the stool specimens, the three plus positive (+++), the two plus positive (++) and the one plus positive (+) were found in 7, 43 and 24 out of 120 cases in group 1. The one plus positive (+) was found in 2 and 6 out of 50 cases in group 2. The two plus positive (++) and the one plus positive (+) were detected in 2 and 1 out of 50 cases in group 3. This Dot-blot ELISA showed that the sensitivity in serum antibody of amoebic patients was 38.29%, which was higher than in using polyclonal antibody to detect Entamoeba histolytica antigen in the stools (22.97%). The specificity in serum antibody of amoebic patients was 61.70%, which was lower than in using polyclonal antibody to detect Entamoeba histolytica antigen in the stools (77.03%).

Abstract: การศึกษา ใช้แอนติเจนชนิด Crude somatic antigen เตรียมจากการสกัดเชื้ออะมีบา สายพันธุ์ HK-9 โดยการเพาะเลี้ยงเชื้อในหลอดแก้ว นำไปใช้ในการวินิจฉัยสารแอนติบอดีต่อเชื้ออะมีบาจากเลือดและ ใช้ Polyclonal antibody เพื่อวินิจฉัยสารแอนติเจนของเชื้ออะมีบาในอุจจาระของผู้ป่วยที่ตรวจพบเชื้อ อะมีบา ด้วยวิธี Dot-blot ELISA การศึกษานี้เป็นวิธีวินิจฉัยสารแอนติบอดีต่อเชื้ออะมีบาจากเลือด และ สารแอนติเจนของเชื้ออะมีบาในอุจจาระด้วยการใช้ Polyclonal antibody ของผู้ป่วยติดเชื้อบิดอะมีบา โดยมีกลุ่มตัวอย่างศึกษา 220 รายซึ่งแบ่งเป็น 3 กลุ่ม ได้แก่ 1) กลุ่มที่ 1 เป็นกลุ่มที่ตรวจอุจจาระแล้วพบเชื้อ อะมีบา ทั้งในระยะ trophozoite และ/หรือ cyst มีจำนวน 120 2) กลุ่มที่2 กลุ่มที่ ตรวจไม่พบเชื้ออะมีบา แต่ตรวจพบพยาธิลำไส้ตัวอื่น ได้แก่ Entamoeba coli, Entamoeba hartmanni, Endolimax nana, Giardia lamblia, Strongyloides stercoralis และ Ascaris lumbricoides จำนวน 50 ราย 3) กลุ่มที่3 เป็นกลุ่มคนปกติที่ตรวจไม่พบพยาธิใดๆ และมีจำนวนทั้งสิ้น 50 ราย จากปฏิกิริยาในการทดสอบด้วยวิธี Dot-blot ELISA ซึ่งตัดสินเป็นผลบวก (+++, ++, +) และผลลบ (-) จากการศึกษาด้วยการวินิจฉัยสารแอนติบอดีต่อเชื้ออะมีบาจากเลือด โดยใช้ความเข้มของสีเป็นเกณฑ์ พบว่า 1)กลุ่มที่1ให้ผลบวกในระดับ +++, ++ และ+ จำนวน 10, 22 และ 15 รายจาก 120 รายตามลำดับ 2)กลุ่มที่2 ให้ ผลบวกในระดับ ++ จำนวน 2 รายจาก 50 ราย 3)กลุ่มที่3ให้ผลบวกในระดับ ++ และ + จำนวน 1 และ 4 ราย จาก 50 รายตามลำดับและจากการ วินิจฉัยสารแอนติเจนของเชื้ออะมีบาในอุจจาระด้วยการใช้ Polyclonal antibodyโดยใช้ความเข้มของสีเป็นเกณฑ์ พบว่า1) กลุ่มที่1 ให้ผลบวกในระดับ +++, ++ และ + จำนวน 7, 43 และ 24 รายจาก 120รายตามลำดับ 2)กลุ่มที่2 ให้ผลบวกในระดับ ++ และ + จำนวน 2 และ 6 รายจาก 50 ราย 3)กลุ่มที่3ให้ผลบวกในระดับ ++, + จำนวน 2 และ1 ราย จาก 50รายตามลำดับ จากการวินิจฉัยสาร แอนติบอดีต่อเชื้ออะมีบาจากเลือด มีความไว เท่ากับ 38.29%ซึ่งสูงกว่าค่าความไวที่ได้จากการวินิจฉัยสาร แอนติเจนของเชื้ออะมีบาในอุจจาระด้วยการใช้ Polyclonal antibody ซึ่งมีค่าเท่ากับ22.97%อย่างไรก็ตาม การวินิจฉัยสารแอนติบอดีต่อเชื้ออะมีบาจากเลือดมีค่าความจำเพาะเท่ากับ 67.70 % ซึ่งต่ำกว่าค่าความจำเพาะที่ ได้จากการวินิจฉัยสารแอนติเจนของเชื้ออะมีบาในอุจจาระด้วยการใช้ Polyclonal antibody ซึ่งมีค่าเท่า กับ 77.03 %

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Pakpimol Mahannop

Role: Thesis Advisors

Created: 2003

Modified: 2553-06-07

Issued: 2010-01-07

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

ISBN: 9740439586

CallNumber: TH B468d 2003

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Public Health

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4336229.pdf	3.11 MB	7	2020-08-18 23:02:34

ใช้เวลา

0.302999 วินาที