Determination of dihydroartemisinin by high performance liquid chromatography

การวิเคราะห์เชิงปริมาณของไดไฮโดรอาร์ติมิซินินด้วยเทคนิคไฮเปอร์ฟอร์มานลิควิดโครมาโตกราฟี

Name: Patcharin Chaisuwan

LCSH: Dihydroartemisinin

LCSH: Chromatographic analysis

LCSH: Electrochemical sensors

LCSH: High performance liquid chromatography

Abstract: ได้ทำการพัฒนาเทคนิคไฮเปอร์ฟอร์มานลิควิดโครมาโทกราฟฟี ที่ตรวจวัดด้วยเครื่องตรวจวัดอุลตร้าไวโอเลตและเครื่องตรวจวัดไฟฟ้าเคมีเพื่อวิเคราะห์ปริมาณของไดไฮโดรอาร์ติมิซินิน (DHA) ในตัวอย่างยา พบว่าสามารถแยกอิพิเมอร์ชนิด α และ β ได้บนคอลัมน์ Waters C8 โดยมีอะซีโทรไนไตรล์และน้ำในอัตราส่วน 50:50 เป็นวัฏภาคเคลื่อนที่แล้วติดตามโดยวัดการดูดกลืนแสงของ DHA ที่ความยาวคลื่น 200 นาโนเมตร สำหรับการตรวจวัดด้วยเครื่องตรวจวัดไฟฟ้าเคมี สามารถตรวจวัดได้ใน reductive mode โดยมี glassy carbon เป็นขั้วทำงานและ Ag/AgCl เป็นขั้วอ้างอิงภายใต้กาซอาร์กอน ในการศึกษาปฏิกิริยาอิพิเมอร์ไรเซชันระหว่างอิพิเมอร์ชนิด α และ β ในตัวทำละลายต่าง ๆ ที่อุณหภูมิห้องพบว่าอัตราการเข้าสู่สมดุลและอัตราส่วนของ αβ อิพิเมอร์ที่สมดุลขึ้นกับชนิดของตัวทำละลาย และพบว่ามีอัตราการเกิดปฏิกิริยาอิพิเมอร์ไรเซชันเร็วที่สุดโดยเปลี่ยนจาก β-อิพิเมอร์ (รูปของแข็งบริสุทธิ์) เป็น α-อิพิเมอร์ เมื่อใช้ตัวทำละลายเป็นสารละลายฟอสเฟต บัฟเฟอร์ ซาลีน พีเอช 7.3 ซึ่งในสภาวะนี้มีการเปลี่ยนเป็น α-อิพิเมอร์ ร้อยละ 100% ซึ่งน่าจะเป็นหลักฐานว่า เมื่อ DHA อยู่ในซีรัมนั้นควรจะอยู่ในรูปของ α-อิพิเมอร์ด้วย อย่างไรก็ดี ในสารละลายผสมระหว่าง เมทานอลหรืออะซิโทรไนไตรล์กับน้ำหรืออะซิเตรตบัฟเฟอร์ pH 5.0 พบว่าอัตราส่วนของ αβ จะเพิ่มขึ้นตามเวลาและเข้าสู่สมดุลภายในเวลา 2 ชั่วโมง โดยอัตราส่วนของ αβ ในเมทานอลเท่ากับ 2.55±0.01 ซึ่งสูงกว่าในอะซิโทรไนไตรล์ (0.06±0.02) เนื่องจาก เมทานอลมีขั้วมากกว่าอะซิโทรไนไตรล์ ผลการทดลองศึกษาอิพิเมอร์ไรเซชันนี้บ่งชี้ให้เห็นว่า DHA จะอยู่ในรูปอิพิเมอร์ใดขึ้นกับชนิดของตัวทำละลายจึงควรให้ความสำคัญเมื่อจะนำระบบแยกนั้น ๆ ไปแปรผลเพื่อศึกษาอิพิเมอร์ในเชิงของจลนศาสตร์ของยา การวิเคราะห์ปริมาณ DHA ในตัวอย่างยาใช้พื้นที่ใต้พีคของสัญญาณทั้งสองอิพิเมอร์รวมกัน พบว่ากราฟมาตรฐานเป็นเส้นตรงในช่วงความเข้มข้น 20 ถึง 400 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร 1) ระดับความเข้มข้นต่ำสุดที่สามารถตรวจวัดได้มีค่าเท่ากับ 0.9±0.1 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร และมีร้อยละของการคืนกลับมีค่าอยู่ในช่วงร้อยละ 97.0 ถึง 103.5 ผลการวิเคราะห์เมื่อใช้เครื่องตรวจวัดไฟฟ้าเคมีพบว่าการตอบสนองของขั้วทำงานชนิดglassy carbon เมื่อทำ amperometric mode จะค่อย ๆ ลดลงเมื่อใช้วิเคราะห์ไประยะหนึ่งเนื่องจากความสกปรกบนผิวของขั้วทำงาน จึงได้ทำการศึกษา pulse mode แต่อย่างไรก็ตามพบว่าไม่สามารถปรับปรุงความไวของการตรวจวัดได้ ดังนั้นการติดตามปริมาณ DHA ด้วยเครื่องตรวจวัดไฟฟ้าเคมีนี้จึงไม่เหมาะสมต่อการวิเคราะห์ปริมาณ DHA ในตัวอย่างยา

Abstract: Two high-performance liquid chromatography (HPLC) methods using either absorbance (UV) or electrochemical detection (ECD) were developed for the determination of dihydroartemisinin (DHA) in drug samples. Two isomers of DHA, the C10-OH α- and β- epimers were separated on a Waters C8 column using a mobile phase of acetonitrile-water (50:50, v/v), with ultraviolet detection (UV) at 200 nm. For ECD, the detector was operated in the reductive mode using a glassy carbon electrode and a Ag/AgCl reference electrode under argon gas to exclude oxygen. This detection system also required manual and electro polishing to activate the glassy carbon electrode. An investigation of DHA epimerization in various solvents at room temperature was also studied using UV detection. The rate of epimerization and ratio of α/β isomers are dependent on the polarity of the solvent. The very fast epimerization of β-DHA (the epimer form in solid state) to α-DHA and the predominance of α-DHA in phosphate buffered saline, pH 7.3 (existing as 100%α- DHA) were observed, this indicated that the α-DHA should be the major form of DHA in human plasma. In mixed solvents of methanol or acetonitrile with water or acetate buffer, pH 5.0, the α/β ratios increased with time reaching an equilibrium within 2 hr. The α/β ratio in methanol is 2.55±0.10 which is larger than in acetonitrile (α/β ratio = 0.06±0.02) because the higher polarity of methanol. The sum of the α- and β-epimer peak areas was used for quantitative analysis of DHA in drug samples. This method gave a linear calibration curve of standard DHA concentration between 20-400 ppm (r 2 = 1) with a detection limit of 0.9±0.1 ppm. The percent recovery of spiked standard DHA to the sample was in the range 97.0- 103.5%. The results of the HPLC analysis with ECD showed that the stability and activity of the glassy carbon electrode in amperometric mode was reduced during analysis. Detection using the pulse mode was attempted in order to overcome this problem. However, optimization of this detection did not increase the sensitivity of the method. Thus electrochemical detection was found to be unsuitable for analysis of DHA in drug samples

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Prapin Wilairat

Role: Thesis Advisors

Created: 2003

Modified: 2020-04-19

Issued: 2009-11-30

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

ISBN: 9740434177

CallNumber: TH P294d 2003

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Applied Analytical and Inorganic Chemistry

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4336617.pdf	2.44 MB	37	2018-05-29 01:43:15

ใช้เวลา

-0.727468 วินาที