Characterization of the relationship between the dengue virus and the Aedes Albopictus Cell Line, C6/36

การศึกษาความสัมพันธ์เกี่ยวเนื่องระหว่างเชื้อไวรัสเด็งกี่และเซลล์เพาะเลี้ยง C6/36 ที่มาจากยุงพาหะชนิด Aedes Albopictus

Name: Prirayapak Sakoonwatanyoo

MeSH: Receptors, Laminin

MeSH: Apoptosis

Othors: Dengue Virus

Abstract: Dengue viruses are positive single-stranded RNA viruses. They are the causative agents of dengue fever, dengue hemorrhagic fever and dengue shock syndrome. The principal vectors for transmission of the viruses are the Aedes albopictus and Aedes egypti mosquitoes. Understanding the relationship between the dengue viruses and insect vector host cells may lead to the development of novel strategies to combat transmission of the viruses. One cell line derived from larva of Ae. albopictus, namely C6/36, is susceptible to dengue viruses and can be used as a model system. This study investigated the dengue virus: mosquito cell interactions with regards to internalization and propagation of the viruses in C6/36 cells as well as investigating putative binding proteins which the viruses utilize to enter the mosquito cells. Internalization of all four serotypes of the dengue virus into C6/36 cells is an essentially linear process, with no plateau of internalization even after 5 hours. Production of de novo viruses takes between 14 (serotype 4) and 19 (serotype 3) hours post infection, and maximal virus is produced between 6 and 10 days post infection after which time a significant long term (up to 20 weeks) reduction in titer is seen. No evidence of apoptosis or deficit in cell number is seen in response to infection as compared to controls. Virus overlay protein binding assay identified a single band of approximately 50kD for dengue serotypes 2, 3 and 4 which co-migrated with the 37/67kDa high affinity laminin receptor protein. Both antibodies directed against the 37/67kDa high affinity laminin receptor protein as well as soluble laminin significantly inhibited the internalization of dengue virus serotypes 3 and 4, but not serotypes 1 and 2. As such the 37/67kDa high affinity laminin receptor is the first identified mosquito dengue virus receptor protein.

Abstract: เชื้อไวรัสเด็งกี่ เป็น RNA ไวรัส เป็นสาเหตุที่ทำให้เกิดโรคไข้เลือดออกโดยสามารถแบ่งตามความ รุนแรงของโรคได้เป็น 3 ระดับคือ dengue fever, dengue hemorrhagic fever และ dengue shock syndrome. เชื้อไวรัสเด็งกี่แบ่งตามซีโรไทป์ได้เป็น 4 ชนิดคือ 1, 2, 3 และ 4 ยุงที่เป็นพาหะของเชื้อไวรัสเด็งกี่คือยุงลายชนิด Aedes albopictus และ Aedes egypti การศึกษาถึงความสัมพันธ์เกี่ยวเนื่องระหว่างไวรัสเด็งกี่และเซลล์ เพาะเลี้ยงที่มาจากยุงพาหะอาจจะนำไปสู่การพัฒนายารักษาโรคหรือยาฆ่าแมลงที่จำเพาะเจาะจงได้ เซลล์ เพาะเลี้ยง C6/36 ที่ใช้ในการศึกษานี้เป็นเซลล์ที่ได้มาจากลูกน้ำของยุง Aedes albopictus และได้นำมาใช้เพื่อเป็น เซลล์ต้นแบบในการศึกษาการติดเชื้อไวรัสเดงกี่ในห้องทดลอง การศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างไวรัสเด็งกี่ทั้ง 4 ซีโรไทป์และเซลล์เพาะเลี้ยง C6/36 ในการทดลองนี้ มุ่งเน้นถึงขั้นตอนการเข้าเซลล์ (internalization), การผลิตไวรัสใหม่ (propagation) หลังจากเซลล์ติดเชื้อไวรัส และโปรตีนตอบรับ (putative binding protein) ที่ไวรัสเด็งกี่ใช้ในการเข้าสู่เซลล์ โดยพบว่าการเข้าสู่เซลล์ เพาะเลี้ยงของไวรัสทั้ง 4 ซีโรไทป์ มีลักษณะเพิ่มขึ้นตามเวลาที่ผ่านไปโดยไม่พบการอิ่มตัวของการเข้าเซลล์ของ ไวรัสในช่วง 5 ชั่วโมง การผลิตไวรัสใหม่หลังจากไวรัสเข้าสู่เซลล์แล้วใช้เวลาระหว่าง 14 ชั่วโมง (ซีโรไทป์ 4) ถึง 19 ชั่วโมง (ซีโรไทป์ 3) การหาค่าการผลิตไวรัสสูงสุดหลังการติดเชื้อพบว่าแตกต่างตามซีโรไทป์โดยพบปริมาณ ไวรัสที่ผลิตใหม่มากสุดใช้เวลา 6-10 วัน นอกจากนี้เมื่อมีการเลี้ยงเซลล์ที่ติดเชื้อไวรัสเป็นระยะเวลานานขึ้นถึง 20 สัปดาห์ พบว่ามีการลดลงของการผลิตไวรัสที่ยังคงสภาพการติดเชื้อได้ ซึ่งไม่ได้เป็นผลมาจากจำนวนเซลล์ที่ ลดลงหรือการตายของเซลล์แบบ apoptosis เมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ปกติที่ไม่มีการติดเชื้อไวรัสเด็งกี่ การศึกษา เพิ่มเติมเพื่อค้นหาโปรตีนตอบรับสำหรับไวรัสเดงกี่ ซีโรไทป์ 2, 3 และ 4 ใช้ในการเข้าสู่เซลล์โดยวิธี VOPBA พบว่าไวรัสสามารถจับกับโปรตีนขนาดประมาณ 50 kDa ซึ่งเป็นตำแหน่งเดียวกับโปรตีน 37/67kDa high affinity laminin receptor ในการทดลองเดียวกัน นอกจากนั้นผลการทดลองโดยการใช้สารสองชนิดคือ 37/67kDa high affinity laminin receptor antibody และ soluble laminin พบว่าสารทั้งสองชนิด สามารถ หยุดยั้งการเข้าสู่เซลล์ได้เฉพาะซีโรไทป์ 3 และ 4 ดังนั้นการศึกษานี้แสดงให้เห็นเป็นครั้งแรกว่าโปรตีน 37/67kDa high affinity laminin receptor เป็นชนิดของโปรตีนตัวตอบรับบนผิวเซลล์ที่ไวรัสเด็งกี่ใช้ในการเข้า สู่เซลล์ยุงเพาะเลี้ยง

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Smith, Duncan R

Role: Thesis Advisors

Created: 2005

Modified: 2553-06-17

Issued: 2009-07-30

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

ISBN: 9740466583

TH P958c 2005

eng

DegreeName: Doctor of Philosophy

Level: Doctoral Degree

Descipline: Molecular Genetics and Genetic Engineering

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4537115.pdf	4.75 MB	22	2026-05-26 18:16:01

ใช้เวลา

0.323956 วินาที