Molecular cloning of a putative octopamine/tyramine receptor from penaeus monodon

การโคลนตัวตอบรับ octopamine/tyramine จากกุ้งกุลาดำ

Name: Chetsada Pothiratana

LCSH: Penaeus monodon

LCSH: Neurotransmitters

LCSH: Molecular cloning

Abstract: Neurotransmitters are involved in many physiological regulations in crustaceans as well as in mammals. The black tiger prawn (Penaeus monodon) is an economically important animal in Thailand and South East Asian countries. Therefore, the study of their neurotransmitter receptors will lead to an understanding of their physiological mechanisms and can be used to improve prawn production in the future. Octopamine and tyramine are neurotransmitters that are involved in many physiological aspects such as ovarian muscle contraction and learning behavior. The purposes of this study were to clone neurotransmitter receptors from black tiger prawns and to analyze their tissue distribution profiles. In this study, total RNA from brain and thoracic ganglia of P. monodon was isolated and used to perform reverse transcription. The first strand cDNA was used to perform PCR with degenerate primers in the conserved sequences of the third and the seventh transmembrane domains of G-protein coupled receptors. A PCR product of about 850-bp was sequenced. Two variants, 53 and 60 variants, were obtained. These sequences were used to design primers to determine 3/ and 5/ ends. Amplification of the 3/ end was determined by 3/ Rapid Amplification of cDNA Ends (3/ RACE). Two PCR products with different sizes, L-3RACE and S-3RACE, were obtained. In addition, 5/ end was amplified from a black tiger prawn’s DraI Genome WalkerTM library. One 800-bp 5/ end product was obtained. DNA amplification of the full-length gene was performed in genomic DNA. The full-length fragment, Pm-OA/TyrR-53 contained the sequences corresponding to the 5/ end product, 53-variant middle sequence and L-3RACE. Its longest open reading frame was 1329 nucleotides coding for 443 amino acids. In addition, the partial sequence, Part-Pm-OA/TyrR-60, had sequences corresponding to the 60-variant middle sequence and S-3RACE. The 5/ end of this gene could not be cloned. Its coding region was 894 nucleotides coding for 298 amino acids. They reveal the sequence similarity to octopamine/tyramine receptor negatively coupled to adenylate cyclase. In female wild broodstock prawns, the expressions of both 53 and 60 variants were detected in brain and thoracic ganglia and heart. Only the 53 variant was detected in ovaries whereas only the 60 variant was detected in the abdominal muscle, suggesting that both variants may be involved in different physiological regulation and may have different functions in various tissues of P. monodon

Abstract: สารสื่อประสาทมีความเกี่ยวข้องกับกระบวนการทางสรีรวิทยาในสิ่งมีชีวิต ดังนั้นการศึกษาตัว ตอบรับของสารสื่อประสาทในกุ้งกุลาดำ น่าจะทำ ให้เกิดความเข้าใจถึงกลไกการตอบสนองต่อสาร สื่อประสาทและนำ ไปใช้ในการเพิ่มผลผลิตกุ้งได้ octopamine และ tyramine เป็นสารสื่อประสาทที่ เกี่ยวข้องกับกระบวนการทางสรีรวิทยาหลายประการ เช่น การหดตัวของกล้ามเนื้อบริเวณรังไข่ พฤติกรรมการเรียนรู้ จุดประสงค์ของการศึกษานี้คือการโคลนตัวตอบรับของสารสื่อประสาทจาก กุ้งกุลาดำ และศึกษาการแสดงออกในอวัยวะต่างๆ การศึกษานี้ RNA จากระบบประสาทถูกนำ มา สร้าง cDNA โดย reverse transcription และนำ มาทำ PCR โดยใช้ degenerate primer ซึ่งออกแบบ จากลำ ดับกรดอะมิโนอนุรักษ์ในช่วง transmembrane ที่ 3 และ 7 ของตัวตอบรับสารสื่อประสาท ชนิด G-protein coupled receptor ผลทดลองพบผลผลิตขนาด 850 นิวคลีโอไทด์ซึ่งพบว่ามี 2 รูป แบบ ได้แก่ แบบ 53 และ 60 ลำ ดับนิวคลีโอไทด์ที่ได้นี้ถูกนำ มาออกแบบ primer เพื่อโคลนชิ้นส่วน ด้าน 3/ และ 5/ โดยวิธี 3/ RACE และ วิธีเพิ่มจำ นวนใน DraI genome walker library ตามลำ ดับ ข้อ มูลที่ได้ถูกนำ ไปออกแบบ primer เพื่อสร้างชิ้น full length gene ในการศึกษานี้สามารถโคลนชิ้น full length gene ของ แบบ 53 (Pm-OA/TyrR-53) และ ชิ้นที่ขาดส่วนทาง 5/ ของแบบ 60 (Part-Pm- OA/TyrR-60) จาก genomic DNA Pm-OA/TyrR-53 ประกอบด้วยส่วนของ open reading frame ถอดรหัสได้ 443 กรดอะมิโน ส่วน Part-Pm-OA/TyrR-60 ประกอบด้วยส่วนของ coding region ถอดรหัสได้ 298 กรดอะมิโน ทั้งคู่มีความคล้ายคลึงกับตัวตอบรับ octopamine/tyramine ชนิดยับยั้ง การทำ งานของเอนไซม์ adenylate cyclase แต่ยีนทั้ง 2 แบบ มีการแสดงออกที่แตกต่างกันในกุ้งแม่ พันธุ์ โดยทั้งคู่พบการแสดงออกที่ สมองและปมประสาทช่วงอก และหัวใจ รังไข่มีการแสดงออก เพียงยีนแบบ 53 ส่วนในกล้ามเนื้อช่วงท้องมีการแสดงออกเพียงยีนแบบ 60 เท่านั้น

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Vijittra Leardkamolkarn

Role: Thesis Advisors

Created: 2003

Modified: 2013-07-16

Issued: 2009-07-27

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

ISBN: 9740430759

CallNumber: TH C526m 2003

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Molecular Genetics and Genetic Engineering

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4336306-eng.pdf	972.14 KB	4	2018-05-29 01:18:07
2	4336306-tha.pdf	951.56 KB	5	2018-05-29 01:18:10
3	4336306.pdf	11.38 MB	5	2018-05-29 01:18:11

ใช้เวลา

-0.526589 วินาที