Analysis of FLT3 mutations in Thai patients with acute myeloid leukemia

การศึกษามิวเตชันของยีน FLT3 ในผู้ป่วยไทยที่เป็นโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวมัยอีลอยด์ชนิดเฉียบพลัน

Name: Narongrit Sritana

MeSH: Vascular Endothelial Growth Factors

MeSH: Leukemia, Myelocytic, Acute

MeSH: Receptor, trkC

Abstract: ความผิดปกติของ receptor tyrosine kinase (RTK) มีบทบาทสำคัญในการเกิดพยาธิสภาพของโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาว ในต่างประเทศ มิวเตชันของยีน FMS-like tyrosine kinase 3 (FLT3) ซึ่งเป็นสมาชิกของ RTK กลุ่มที่ III พบได้บ่อยในผู้ป่วยโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวมัยอีลอยด์ชนิดเฉียบพลัน แต่ยังไม่เคยมีผู้รายงานถึงความผิดปกติของยีนดังกล่าว ทั้งในประเทศไทยหรือในประเทศเพื่อนบ้านแถบเอเชียตะวันออกเฉียงใต้ ดังนั้นผู้ทดลองจึงได้ทำการทดลองและพัฒนาวิธีการตรวจหาความผิดปกติของยีน FLT3 เพื่อตรวจหาอุบัติการณ์และชนิดของมิวเตชันนี้ในประเทศไทย รวมถึงศึกษาหาความสัมพันธ์ของยีนดังกล่าวกับอาการทางคลินิก และผลการตรวจทางห้องปฏิบัติการอื่นๆ ของผู้ป่วย การศึกษาครั้งนี้ทำการศึกษาในผู้ป่วยคนไทยที่เป็นโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวมัยอีลอยด์ชนิดเฉียบพลันจำนวน 256 ราย โดยทำการสกัดสารพันธุกรรมชนิด DNA และ RNA จากสิ่งส่งตรวจที่เป็นเซลล์ไขกระดูกหรือเลือด cDNA และ genomic DNA ที่ได้จากผู้ป่วยจะถูกนำไปวิเคราะห์ด้วยวิธี reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) และ PCR ตามลำดับ เพื่อตรวจหามิวเตชันของ FLT3 ที่เป็น internal tandem duplication (FLT3 ITD) ส่วนการตรวจหามิวเตชันของ tyrosine kinase domain (FLT3-TKD) ที่ตำแหน่ง codon 835 และ 836 จะใช้วิธีย่อยด้วยเอนไซม์ตัดจำเพาะ EcoRV การศึกษาวิเคราะห์ของ dual mutation จะใช้วิธี RT-PCR ตามด้วย restriction fragment length polymorphism (RFLP) และมีการใช้วิธีการโคลนนิ่งร่วมกับการประเมินลำดับเบส (sequencing) ในกรณีที่ตรวจพบมิวเตชันชนิดใหม่ จากการศึกษาพบมิวเตชันชนิด ITD จำนวน 63 ราย (ร้อยละ 24.7) และ TKD จำนวน 8 ราย (ร้อยละ 3.1) และตรวจพบมิวเตชันร่วมกันทั้ง 2 ชนิด ในผู้ป่วยคนเดียวกัน จำนวน 7 ราย (ร้อยละ 2.7) ผลจากการทดลองด้วยวิธีประเมินลำดับเบสในตัวอย่างที่เลือกแบบสุ่มที่เป็นมิวเตชันชนิด ITD พบว่าชิ้นส่วนของมิวเตชันมีการซ้ำซ้อนเป็นแบบ in-frame โดยเป็นชุดสาม แต่มีขนาดแตกต่างกันไปในผู้ป่วยแต่ละคน ตั้งแต่ 7 ถึง 67 กรดอะมิโน แต่ถึงอย่างไรก็ตามในทุกๆ ชิ้นส่วน จะตรวจพบชุดของลำดับกรดอะมิโนที่เป็นส่วนที่เรียกว่า SH2-binding motif คือพบ YFYV หรือ YEYDLK เสมอ สำหรับมิวเตชันชนิด TKD พบว่า Asp835Tyr เป็นมิวเตชันที่เกิดบ่อยที่สุด โดยตรวจพบจำนวน 7 ราย ในทั้งหมด 15 ราย รองลงมาคือ Asp835His, Asp835Glu, Asp835Ala, และ Ile836del นอกจากนี้ยังตรวจพบมิวเตชันชนิดใหม่ คือ Asp835del + Ile836Val ซึ่งไม่เคยมีผู้รายงานมาก่อนในวรรณกรรม การศึกษาความสัมพันธ์ของมิวเตชันกับข้อมูลทางคลินิกพบว่า ผู้ป่วยที่ตรวจพบมิวเตชัน มักจะตรวจไม่พบความผิดปกติทางโครโมโซมด้วยวิธีมาตรฐาน การตรวจพบมิวเตชันในตัวอย่างของผู้ป่วยยังมีความสัมพันธ์กับการเพิ่มจำนวนเซลล์เม็ดเลือดขาวในกระแสเลือดจำนวนมากอย่างมีนัยสำคัญ และยังสัมพันธ์กับการมีค่าอัตรารอดชีวิตที่ต่ำกว่าปกติด้วย สำหรับผลทางอิมมูโนฟีโนทัยป์พบว่าไม่มีความสัมพันธ์กับการมีมิวเตชันขณะนี้ได้มีการพัฒนาและจัดตั้งวิธีการตรวจหาชนิดของมิวเตชันของยีน FLT3 ขึ้นในประเทศไทย และพบว่ามิวเตชันชนิดนี้เป็นความผิดปกติทางอณูวิทยาที่มีความจำเพาะและพบได้บ่อยในคนไทยที่เป็นมะเร็งเม็ดเลือดขาวมัยอีลอยด์ชนิดเฉียบพลัน โดยมีอุบัติการณ์ใกล้เคียงกับประเทศทางตะวันตก ผู้ทดลองได้ค้นพบมิวเตชันชนิดใหม่ของยีน FLT3 ซึ่งไม่เคยมีผู้รายงานมาก่อน ซึ่งควรจะต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมในกลุ่มประชากรที่ใหญ่ขึ้น เพื่อดูความสำคัญของมิวเตชันใหม่นี้ในการบอกพยากรณ์โรคผู้ป่วยต่อไป การตรวจพบอุบัติการณ์ที่สูงของมิวเตชันของยีน FLT3 ในคนไทยจะเป็นประโยชน์อย่างยิ่งในการพัฒนารักษาแบบใหม่ที่มุ่งเป้าแก้ไขความผิดปกติระดับโมเลกุลในเซลล์มะเร็งของผู้ป่วย โดยเฉพาะอย่างยิ่งการพัฒนายาที่มีความจำเพาะต่อยีน FLT3 ซึ่งอาจนำไปสู่การรักษาที่หายขาดของผู้ป่วยมะเร็งเม็ดเลือดขาวมัยอีลอยด์ชนิดเฉียบพลันที่กำลังทนทุกข์ทรมานและเสียชีวิตจากโรคร้ายแรงนี้

Abstract: Deregulation of receptor tyrosine kinases (RTKs) has been implicated in the molecular pathogenesis of leukemia. Mutation of FMS-like tyrosine kinase 3 (FLT3), a member of class III RTKs, has been reported to be the most frequent mutation in patients with acute myeloid leukemia (AML) in the West. No data currently exists regarding the incidence and characteristics of FLT3 mutation in AML patients in Thailand or Southeast Asian countries. The objective of this study was to develop molecular methods to detect FLT3 mutation whereby its incidence in adult AML patients in Thailand could subsequently be determined. The clinical and laboratory parameters of patients with wild-type FLT3 and mutant FLT3 were also analyzed. Bone marrow or blood samples from 256 untreated adult AML patients were subject to RNA and DNA extraction. cDNA and genomic DNA were analyzed by RT-PCR and standard PCR, respectively, to detect FLT3 internal tandem duplication (ITD) mutation. FLT3-tyrosine kinase domain (TKD) mutations in codon 835 and 836 were screened by RFLP analysis using EcoRV enzyme. Dual mutations were characterized by RT-PCR followed by RFLP. The aberrant products of FLT3-ITD and FLT3-D835 mutation were identified by sequencing. Isolated ITD and TKD were identified in 63 (24.6%) and 8 (3.1%) of the cases, respectively. Dual mutations were found in 7 cases (2.7%). Sequence analysis of 14 ITD cases revealed that all duplicated fragments were in-frame duplications within the juxtamembrane region and the size varied from 7 to 67 amino acids. Interestingly, at least 1 SH2-binding motif including YFYV or YEYDLK was found. Six types of TKD mutations were identified with Asp835Tyr being the most frequent followed by Asp835His, Asp835Glu, Asp835Ala, and Ile836del. A novel mutation, Asp835del + Ile836Val was identified in one case. FLT3 mutations were mostly found in patients with a normal karyotype. FLT3-ITD was significantly associated with high peripheral white blood cells counts and shorter overall survival than wild type FLT3. Immunophenotypic profile did not differ between wild-type and mutant FLT3. The molecular approach to detect and characterize FLT3 mutations is now established in Thailand. FLT3 mutation is a unique and frequent molecular target in Thai AML patients and its incidence is as high as that of the western countries. The prognostic impact of the novel mutation identified in this study remains to be determined in a larger population. The high prevalence of FLT3 activating mutation in Thai patients makes it a potential target for novel therapy. It is hoped that the results of this study should be of value for future research and development of promising FLT3 inhibitory drugs that will lead to cure of our patients who are suffering and dying from this tragic disease.

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Chirayu Auewarakul

Role: Thesis Advisors

Created: 2005

Modified: 2021-01-11

Issued: 2009-07-03

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

ISBN: 9740460631

CallNumber: TH N232a 2005

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Immunology

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4536761.pdf	2.55 MB	42	2026-05-26 18:16:01

ใช้เวลา

-0.562015 วินาที