แจ้งเอกสารไม่ครบถ้วน, ไม่ตรงกับชื่อเรื่อง หรือมีข้อผิดพลาดเกี่ยวกับเอกสาร ติดต่อที่นี่ ==>
หากไม่มีอีเมลผู้รับให้กรอก thailis-noc@uni.net.th
หากไม่มีอีเมลผู้รับให้กรอก thailis-noc@uni.net.th
Niwed Kullawong. Cloning and expression of biological active human Erythropoietin in mammalian cells. Master's Degree(Molecular Genetics and Genetic Engineering). Mahidol University. : Mahidol University, 2009-07-01.
Cloning and expression of biological active human Erythropoietin in mammalian cells
การสร้างและคัดเลือกเซลล์ที่แสดงออก Erythropoietin ของมนุษย์ในเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม
Name: Niwed Kullawong
MeSH:
Gene Amplification
MeSH:
Erythropoietin
MeSH:
Gene Expression
MeSH:
Methotrexate
Abstract:
Erythropoietin (EPO) is a hematopoietic growth factor which stimulates erythropoiesis (red blood cell production). One widely used therapeutic hormone is a well-known recombinant human erythropoietin (rHuEPO) produced from genetically engineered Chinese Hamster Ovary cells. This 34-kDa glycoprotein is produced primarily by the kidney. During the post-translational modification, glycosylation occurs with the addition of 3 N-linked (at Asn-24, -38 and -83) and one O-linked (at Ser-126) acidic oligosaccharides. rHuEPO has been used for the treatment of anemia-associated diseases including rheumatoid arthritis, AIDS, and cancer. This recombinant product is prescribed on the assumption that it will increase patients Hb level, reduce the need for transfusion and tumor progression, and thus improve quality of life and survival. This work has established a CHO based expression system to produce active rHuEPO applicable for large scale pharmaceutical production. After cloning, selection and 4-rounds of DHFR/MTX-mediated gene amplification, the stable CHO cell lines efficiency in secreting rHuEPO were established. The expressed rHuEPO migrated in SDS-PAGE as a broad band of 40-45 kDa which was comparable with rHuEPO reference (HEMAX®). This protein was shown to have all three N-linked glycosylation sites and its carbohydrate structure termini were capped with the functional sialic acid residuals. By analysis of in vitro interaction to its receptor (EPO-R), rHuEPO was proven to be biologically active by colorimetric MTT assay after stimulation of factor-dependent TF-1 cell proliferation in dose-dependent manner. Moreover, normocytic BALB/c mice injection was employed to confirm its bioactivity in vivo. Without any purification, the rHuEPO expressed in this study showed its principal function in physiological conditions by significantly increasing % reticulocyte in testing animal. Thus, these cell lines can be applied for large-scaled production in the biopharmaceutical industry in Thailand in the future
Abstract:
Erythropoietin (EPO) เป็นฮอร์โมนที่ผลิตมาจากไต ทำงานเกี่ยวข้องกับการเร่งการสร้างเม็ดเลือดแดงในร่างกาย recombinant human erythropoietin (rHuEPO) ที่ใช้กันทั่วไปซึ่งสร้างมาจาก Chinese hamster ovary (CHO) cells ด้วยเทคนิคการตัดต่อทางพันธุกรรม เป็นฮอร์โมนบำบัดโรค EPO เป็นโปรตีนที่มีขนาด 34 kDa ซึ่งมีคาร์โบไฮเดรต เป็นส่วนประกอบสำคัญโดยในโมเลกุลประกอบด้วยโครงสร้างน้ำตาลชนิด N-linked อยู่สามตำแหน่งที่กรดอะมิโน Asn 24 38 และ 83 และชนิด O-linked อยู่หนึ่งตำแหน่งที่กรดอะมิโน Ser 126 rHuEPO ถูกใช้ในผู้ป่วยที่มีภาวะโลหิตจางจากโรคต่างๆ รวมทั้ง โรคข้ออักแสบรูมาตอยด์ เอดส์และมะเร็ง เนื่องจากสามารถเพิ่มระดับฮีโมโกลบิน ลดการเปลี่ยนถ่ายเลือด เพิ่มคุณภาพชีวิตและเพิ่มอัตราการรอดชีวิตของผู้ป่วยได้ งานวิจัยนี้ได้พัฒนาระบบการผลิต rHuEPO จาก CHO cells ซึ่งเหมาะสำหรับการผลิตในเชิงอุตสาหกรรมในอนาคต หลังจากผ่านกระบวนการสร้างและคัดเลือก และขบวนการเพิ่มการแสดงออกของยีนแล้วสามารถสร้างกลุ่มของเซลล์ยั่งยืนที่ผลิต rHuEPO ได้สำเร็จ โปรตีนที่สร้างได้เคลื่อนที่ใน SDS-PAGE ในลักษณะแบนกว้างซึ่งเทียบเคียงกับ rHuEPO อ้างอิง (HEMAX®) โดยพบโครงสร้างน้ำตาลชนิด N-linked ได้ทั้งสามตำแหน่ง และพบว่ามี sialic acid เป็นส่วนประกอบสำคัญของโครงสร้างน้ำตาลเหล่านี้ด้วย ส่วนการศึกษาการทำงานของโปรตีน พบว่าสามารถกระตุ้นการเพิ่มจำนวนของเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดแดง (TF-1 cells) ผ่านทางตัวรับ (EPO receptor) ได้ในหลอดทดลอง ส่วนการกระตุ้นการสร้างเซลล์เม็ดเลือดแดงในหนูทดลอง (BALB/c) นั้น พบว่าสามารถเพิ่มจำนวนเม็ดเลือดแดงตัวอ่อน (reticulocyte) ได้และเทียบเคียงได้กับโปรตีนอ้างอิง จึงกล่าวได้ว่าการศึกษานี้ได้ผลิตเซลล์ยั่งยืนที่สามารถนำไปใช้ในการบวนการชีวอุตสาหกรรมต่อไปได้"
Mahidol University
Address:
NAKHON PATHOM
Email:
liwww@mahidol.ac.th
Name: Witoon Tirasophon
Role:
Thesis Advisors
Created:
2009-07-01
Modified:
2021-01-16
Issued:
2009-07-01
วิทยานิพนธ์/Thesis
application/pdf
ISBN:
9740461204
CallNumber:
TH N735c 2005
eng
DegreeName: Master of Science
Level: Master's Degree
Descipline: Molecular Genetics and Genetic Engineering
Grantor: Mahidol University
©copyrights Mahidol University
RightsAccess:
ใช้เวลา
-0.621777 วินาที
Niwed Kullawong
| Title | Contributor | Type |
|---|---|---|
| Cloning and expression of biological active human Erythropoietin in mammalian cells
มหาวิทยาลัยมหิดล Niwed Kullawong | Witoon Tirasophon | วิทยานิพนธ์/Thesis |
| Investigation of butyrate-producing bacteria and genes from fecal samples of Thai volunteers
มหาวิทยาลัยอุบลราชธานี Siam Popluechai;Niwed Kullawong;Auttapon Taluengjit;Patcharee Pripdeevech;Art Hiranyakas;Kongkiat Kespechara | บทความ/Article | |
| Prevalence and Factors Associated with Type 2 Diabetes Mellitus among Middle-Aged and Elderly Lisu Hill tribe People, Northern Thailand: A Cross-sectional Study
มหาวิทยาลัยแม่ฟ้าหลวง Chalitar Chomchoei;Tawatchai Apidechkul;Siriyaporn Khunthason;Niwed Kullawong;Vivat Keawdounglek;Ratipark Tamornpark;Panupong Upala;Fartima Yeemard;Chanyanut Wongfu | บทความ/Article |
Witoon Tirasophon