การสังเคราะห์ลำดับกรดอะมิโนบางส่วนของฮอร์โมนเพิ่มระดับน้ำตาลในเลือด จากกุ้งก้ามกราม Macrobrachium rosenbergii เพื่อผลิตแอนติบอดีที่จำเพาะต่อฮอร์โมนเพิ่มระดับน้ำตาลในเลือด

Synthesis of partial amino acid sequence of crustacean hyperglycemic hormone from Macrobrachium rosenbergii for antibody production against crustacean hyperglycemic hormone

Name: นันทิกา ปานจันทร์

ThaSH: กุ้งก้ามกราม

ThaSH: กรดอะมิโน

ThaSH: เปปไทด์

ThaSH: ฮอร์โมน

Abstract: สังเคราะห์ลำดับกรดอะมิโนบางส่วนทางปลาย C ของฮอร์โมนเพิ่มระดับน้ำตาลในเลือดจากก้านตากุ้งก้ามกรามโดยวิธี solid phase peptide synthesis คือ เพปไทด์ YANAVQV-NH2 (T-) และ เพปไทด์ YANAVQTV-NH2 (T+) นำเพปไทด์เชื่อมกับโปรตีน BSA และใช้กระตุ้นให้หนูขาวสร้างแอนติบอดีต่อเพปไทด์ ตรวจหาไตเตอร์และคุณภาพของแอนติบอดีต่อเพปไทด์ทั้งสองโดยวิธี indirect immunoperoxidase ELISA และ dot-ELISA และใช้ซีรัมที่มีไตเตอร์สูงที่สุดตรวจหาฮอร์โมน ที่เพิ่มระดับน้ำตาลในเลือดในสารสกัดจากก้านตาที่แยกด้วยกระบวนการทาง RP-HPLC โดยวิธี dot-ELISA พบสารคล้ายเพปไทด์ T- และเพปไทด์ T+ ในแฟรคชันที่ 30 และ 38 ตามลำดับ อย่างไรก็ตามจากการตรวจหาการออกฤทธิ์ ของฮอร์โมนเพิ่มระดับน้ำตาลในเลือด พบว่า แฟรคชันที่ 37-39 มีความสามารถในการเพิ่มระดับน้ำตาลในเลือดกุ้ง แต่แฟรคชันที่ 30 ไม่มีความสามารถในการเพิ่มระดับน้ำตาลในเลือดกุ้ง จากการใช้แอนติบอดีต่อเพปไทด์ทั้งสองเพื่อตรวจหาแหล่ง ที่พบฮอร์โมนเพิ่มระดับน้ำตาลในเลือดในก้านตาโดยวิธี immunocytochemistry พบว่า แอนติบอดีต่อเพปไทด์ T+ เท่านั้นที่มีการติดสีที่เซลส์ประสาทใน Medullu Terminalis Ganglionic X-Organ (MTGXO) จำนวน 24+-5 เซลล์ ซึ่งมีเส้นผ่านศูนย์กลางของเซลล์เท่ากับ 18+-3 ไมโครเมตร และที่เส้นใยประสาทที่ส่งไปยังต่อมไซนัส จากผลการทดลองครั้งนี้แสดงว่าเฉพาะแอนติบอดีต่อเพปไทด์ T+ เท่านั้นที่สามารถจับกับฮอร์โมนเพิ่มระดับน้ำตาลในเลือด ดังนั้นลำดับกรดอะมิในของฮอร์โมนนี้น่าจะประกอบด้วยกรดอะมิโน 72 หน่วย โดยมีทรีโอนีนอยู่ในตำแหน่งที่ 71

Abstract: Heptapeptide (YANAVQV-NH2 = T-) and octapeptide (YANAVQTV-NH2 = T+), the putative C-terminal of crustacean hyperglycemic hormone (CHH) from the eyestalk of the giant freshwater prawn Macrobrachium rosenbergii, were synthesized by solid phase peptide synthesis and conjugated to bovine serum albumin, then used to immunize swiss mice. The titer and quality of the anti-peptide antibodys were determined by indirect immunoperoxidase ELISA and dot-ELISA. The serum contain high titer of each antipeptide antibody was used to detect the presence of the natural CHH in the eyestalk extract after separated by one step RP-HPLC with Dot-ELISA. The immunoreactive substances were found in fraction 30 with anti T- antibody and in fraction 38 with anti T+ antibody. However, the CHH bioactivity was found in only fraction 37-39. Immunocytochemical localization using the anti T- antibody did not show any specific staining, but the anti T+ antibody revealed staining on a group of 24+-5 neurons with diameter 18+-3 um in Medulla Terminalis Ganglioic X-organ (MTGXO) and their processes leading to the sinus gland. These evidences show strong indication that the anti T+ antibody can bind to the natural CHH therefore this isoform of the CHH in M.rosenbergii consists of 72 residues and threonine is likely to be present at position 71.

จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. สถาบันวิทยบริการ

Address: กรุงเทพมหานคร

Email: cuir@car.chula.ac.th

Name: อมร เพชรสม

Role: ที่ปรึกษา

Name: ไพศาล สิทธิกรกุล

Role: ที่ปรึกษา

Name: ธีรยุทธ วิไลวัลย์

Role: ที่ปรึกษา

Created: 2541

Modified: 2552-07-20

Issued: 2552-07-18

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

ISBN: 9743311149

tha

DegreeName: วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Level: ปริญญาโท

Descipline: เทคโนโลยีทางชีวภาพ

Grantor: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

©copyrights จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	Nanthika_Pa_front.pdf	621.36 KB	44	2019-11-15 15:31:28
2	Nanthika_Pa_ch1.pdf	989.53 KB	30	2019-11-20 17:01:14
3	Nanthika_Pa_ch2.pdf	917.55 KB	24	2019-03-18 20:20:49
4	Nanthika_Pa_ch3.pdf	986.44 KB	27	2020-01-19 12:47:07
5	Nanthika_Pa_ch4.pdf	370.24 KB	20	2020-01-19 12:45:35
6	Nanthika_Pa_back.pdf	564.54 KB	16	2019-03-18 20:21:04

ใช้เวลา

0.059335 วินาที