การนับจำนวนแบคทีเรียในโยเกิร์ตด้วยแคเปิลลารีอิเล็กโทรโฟรีซิส

Bacterial Enumeration in Yogurt by Capillary Electrophoresis

Name: อรทัย ลิ้ม

keyword: แคเปิลลารีอิเล็กโทรโฟรีซิส

; Capillary Electrophoresis

Abstract: แคเปิลลารีอิเล็กโทรโฟรีซิส(capillary electrophoresis) เป็นเครื่องมือที่ได้รับความนิยมอย่างแพร่หลาย ในการวิเคราะห์สารหลายชนิดในผลิตภัณฑ์ต่างๆเครื่องมือดังกล่าวน่าจะประยุกต์ใช้ในการวิเคราะห์ งานด้านจุลินทรีย์ งานวิจัยนี้ประยุกต์ใช้แคเปิลลารีอิเล็กโทรโฟรีซิสเพื่อแยกและตรวจนับจำนวน แบคทีเรียสองชนิดคือ Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus และ Streptococcus thermophilus ที่พบในโยเกิร์ต โดยศึกษาปัจจัยที่มีผลต่อเวลาในการเครื่อนที่ของแบคทีเรียในคอลัมน์ ไดัแก่ ผลของ การเติมสาร polyethylene oxide (PEO) รูปแบบการฉีดตัวอย่าง ความยาวของคอลัมน์แคปิลลารีและ อุณหภูมิ ผลการศึกษาพบว่าสภาวะที่เหมาะสมสำหรับการแยกแบคทีเรียผสมทั้งสอง คือใช้ TBE buffer pH 8.4 ที่เติม PEO 0.05 เปอร์เซ็นต์ โดยมีเส้นผ่านศูนย์กลางและความยาวของคอลัมน์แคปิลลารี คือ 100 ไมโครเมตร x 56 ไมโครเมตร ใช้รูปแบบการฉีดตัวอย่าง คือ ฉีดครั้งที่ 1 ให้ความดัน 50 มิลลิบาร์ เป็นเวลา 3 วินาที และฉีดครั้งที่ 2 ให้กระแสไฟฟ้า -5 กิโลโวลต์ เป็นเวลา 120วินาที กระแสไฟฟ้าสำหรับการแยกเท่ากับ 20 กิโลโวลต์ และอุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส โดยแบคทีเรีย Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus และ Streptococcus thermophilus เคลื่อนที่ออกจาก คอลัมน์ด้วยเวลา 6.77 และ 7.19 นาที ตามลำดับ และให้ค่าการแยกสูงสุด คือ 3.16 สภาวะดังกล่าวใช้ จัดทำกราฟมาตรฐานระหว่างจำนวนแบคทีแรียกับพื้นที่พิกเพื่อใช้ในการคำนวนแบคทีเรียใน ตัวอย่างโยเกิร์ต์ด้วยแคเปิลลารีอิเล็กโทรโฟรีซิส ซึ่งผลการนับจำนวนแบคทีเรียทั้งสองในตัวอย่างพบว่า แคเปิลลารีอิเล็กโทรโฟรีซิสสามารถแยกแบคทีเรียทั้งสองชนิดได้ตัวอย่าง โดยใช้เวลาในการวิเคราะห์ แบคทีเรียไม่เกิน 23นาที ผลการเปรียบเทียบการนับจำนวนแบคทีเรียระหว่างวิธีแคเปิลลารีอิเล็กโทรโฟ รีซิส กับวิธี plate count พบว่า วิธีทั้งสองนับจำนวนแบดทีเรียทั้งสองชนิดไม่มีความแตกต่างอย่างมี นัยสำคัญที่ระดับดวามเชื่อมั่น 95เปอร์เซ็นต์(p>0.05) ดังนั้นวิธีแคเปิลลารีอิเล็กโทรโฟรีซิสสามารถ ประยุกต์ใช้ในการนับจำนวนแบคทีเรียในตัวอย่างอาหารชนิดนี้

Abstract: Capillary electrophoresis is a modem instrument popularly used to analyze any compounds in foods, drugs and environmental samples. The aim of this research was to apply this method for enumeration of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus and Streptococcus thermophi/us found in yogurt. The results showed that the chemical addition, injection pattern, length of capillary tube and temperature affected electrophoretic mobility of these bacteria. Both bacteria migrated in the capillary column within 6.77 and 7.19 minutes under an optimum condition as follows: TBE buffer pH 8.4 with 0.05% PEO, inner diameter and length of capillary tube of 100 11m x 56 em, the first injection set of pressure injection at 50 mbar for 3 seconds and the second set of electrokinetic injection at -5 kV for 120 seconds, separation voltage applied and temperature at 20 kVand 25C. This condition yielded a good resolution of 3.16. Standard curves of bacterial number and peak areas were set up under the optimum condition for bacterial enumeration in yogurt sample. Three brands of yogurt (A, B and C) were sampled for bacterial enumeration by capillary electrophoresis compared to the plate count method. The results found that Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus and Streptococcus thermophilus in all samples were separated for the enumeration by capillary electrophoresis with the analysis time of less than 23 minutes. Bacterial numbers of each species in all samples counted by both methods were not significantly different at 95% confidence level (p>0.05). Therefore, capillary electrophoresis was applied for bacterial enumeration in this fermented milk and could be applied to other starter known fermented foods.

มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี. สำนักหอสมุด.

Address: กรุงเทพมหานคร

Email: info.lib@mail.kmutt.ac.th

Name: วรพจน์ สุนทรสุข

Role: อาจารย์ที่ปรึกษา

Name: ลีณา สุนทรสุข

Role: อาจารย์ที่ปรึกษา

Created: 2553-01-31

Modified: 2553-01-31

Issued: 2553-01-31

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

CallNumber: MIC744

tha

DegreeName: วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Level: ปริญญาโท

Descipline: จุลชีววิทยา

Grantor: มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี

©copyrights มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	MIC744.pdf	1.29 MB	436	2026-01-11 18:53:59
2	MIC744ab.pdf	30.92 KB	119	2023-06-21 10:33:16

ใช้เวลา

0.047871 วินาที