การตรวจหาสารต้านเชื้อราจาก Aureobasidium pullulans สายพันธุ์เขตร้อน

Determination of antifungal agents from tropical strains of Aureobasidium pullulans

Name: เสาวลักษณ์ พลอยงาม

ThaSH: สารต้านเชื้อรา

Abstract: ในการศึกษานี้ดำเนินการเพื่อตรวจหาสารต้านเชื้อราจาก Aureobasidium pullulans สายพันธุ์เขตร้อน จำนวน 10 สายพันธุ์ ได้แก่ Deenarn 001 BCU, Deenarn 003 BCU, Deenarn 008 BCU, Deenarn 007 BCU, Deenarn 009 BCU, NRRL 58514, NRRL 58536, NRRL 58516, NRRL 58517 และ NRRL 58520 นำ A. pullulans ทั้ง 10 สายพันธุ์ มาผลิตสารต้านเชื้อราและทำการทดสอบฤทธิ์เบื้องต้นของสารสกัดที่ได้ในการต้านเชื้อราก่อโรคกลุ่ม Aspergillus spp. ทั้ง 4 สายพันธุ์ (A. flavus, A. niger, A. fumigatus, A. terreus) โดยวิธี Well diffusion และ Conidial germination inhibition assay พบว่าสารสกัดจาก A. pullulans NRRL 58536 มีฤทธิ์สูงสุดในการยับยั้งเชื้อรา Aspergilli ได้ทั้ง 4 สายพันธุ์ เมื่อนำสายพันธุ์ดังกล่าวมาทำการเพิ่มผลผลิตของสารต้านเชื้อรา โดยทำการศึกษาหาภาวะที่เหมาะสมของแหล่งคาร์บอน คือ กลูโคส และ ซูโครส ที่ความเข้มข้น 1.5, 2.0 และ 2.5% (w/v) พบว่าสารสกัดจาก A. pullulans NRRL 58536 ในแหล่งคาร์บอนกลูโคสความเข้มข้น 2.5% (w/v) มีฤทธิ์ในการต้านเชื้อราก่อโรคในกลุ่ม Aspergillus spp. ได้สูงสุดทั้ง 4 สายพันธุ์ ซึ่งมีเปอร์เซ็นต์การยับยั้ง 75.00±0.00, 60.00 ±0.05, 60.00±0.00 และ 50.00±0.00 เปอร์เซ็นต์ ต่อ A. flavus, A. niger, A. fumigatus และ A. terreus ตามลำดับ จากนั้นนำ A. pullulans NRRL 58536 มาศึกษาผลของกรดอะมิโน พบว่าสารสกัดจาก A. pullulans NRRL 58536 ในกรดอะมิโนภาวะที่มีฟีนิลอะลานีน ร่วมกับลิวซีนมีฤทธิ์ในการต้านเชื้อรา A. flavus ได้ประสิทธิภาพสูงสุด ซึ่งมีเปอร์เซ็นต์การยับยั้ง 175.00±0.05 เปอร์เซ็นต์ ส่วนสารสกัดจาก A. pullulans NRRL 58536 ในกรดอะมิโนภาวะที่มีโพรลีนร่วมกับลิวซีน พบว่ามีฤทธิ์ในการต้านเชื้อรา A. terreus ได้ประสิทธิภาพสูงสุด ซึ่งมีเปอร์เซ็นต์การยับยั้ง 120.00±0.01 เปอร์เซ็นต์ ขณะที่สารสกัดจาก A. pullulans NRRL 58536 ในกรดอะมิโนภาวะที่มีฟีนิลอะลานีนร่วมกับโพรลีน และ ลิวซีน มีฤทธิ์ในการต้านเชื้อรา A. niger และ A. fumigatus ได้ประสิทธิภาพสูงสุด ซึ่งมีเปอร์เซ็นต์การยับยั้ง 146.00±0.08 และ 170.00±0.06 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ เมื่อนำสกัดจาก A. pullulans NRRL 58536 มาตรวจสอบด้วยเทคนิคเทคนิคโครมาโทกราฟีแบบชั้นบาง เปรียบเทียบกับสารต้านเชื้อราออริโอบาซิดิน เอ (aureobasidin A) พบว่าสารที่ถูกแยกได้จากสารสกัดสายพันธุ์นี้ที่มีค่า Rf เท่ากันกับออริโอบาซิดิน เอ มีค่า Rf เท่ากับ 0.68 บนแผ่น TLC และยังพบสารที่แตกต่างกันอีก 2 ตำแหน่ง มีค่า Rf เท่ากับ 0.45 และ 0.59 จากนั้นนำสารสกัดบริเวณที่มีค่า Rf เท่ากับออริโอบาซิดิน เอ มาวิเคราะห์โดยเทคนิคโครมาโทกราฟีแบบชั้นบางอีกครั้ง และทำการวิเคราะห์เพิ่มเติมด้วยเทคนิค High Performance Liquid Chromatography เทคนิค Spectrophotometry เทคนิค MALDI-TOF Mass Spectrometry และเทคนิค 1H-Nuclear Magnetic Resonance ผลการทดลองพบว่า A. pullulans NRRL 58536 ผลิตสารต้านเชื้อราที่มีผลการวิเคราะห์สอดคล้องกับสารต้านเชื้อราออริโอบาซิดิน เอ

Abstract: Determination of antifungal agents from 10 tropical strains of Aureobasidium pullulans including Deenarn 001 BCU, Deenarn 003 BCU, Deenarn 008 BCU, Deenarn 007 BCU, Deenarn 009 BCU, NRRL 58514, NRRL 58536, NRRL 58516, NRRL 58517 and NRRL 58520 was investigated. All strains were cultivated for antifungal agent production and the extracts were pretested for antifungal activity against 4 pathogenic Aspergillus spp. (A. flavus, A. niger, A. fumigatus, A. terreus) using well diffusion method and conidial germination inhibition assay. The extract from A. pullulans NRRL 58536 showed the most efficient inhibitory activities against all 4 Aspergilli. This strain was selected to enhance antifungal agent production using carbon source optimization including glucose and sucrose at the concentrations of 1.5, 2.0 and 2.5% (w/v). The most effective extract was obtained from A. pullulans NRRL 58536 grown in 2.5% (w/v) of glucose by exhibiting inhibitory activities against all 4 Aspergilli with percent inhibition of 75.00±0.00, 60.00±0.05, 60.00±0.00 and 50.00±0.00 percent for A. flavus, A. niger, A. fumigatus and A. terreus, respectively. A. pullulans NRRL 58536 was further subjected for studying the effect of amino acid on atifungal agent production. The highest antifungal activities against A. flavus was obtained from crude extract of A. pullulans NRRL 58536 under the condition of Phenylalanine plus Leucine with percent inhibition of 175.00±0.05 percent while the condition of Proline plus Leucine gave the highest antifungal activities against A. terreus with percent inhibition of 120.00±0.01 percent. The condition of Phenylalanine plus Proline and Leucine gave the highest antifungal activities against A. niger and A. fumigatus with percent inhibition of 146.00±0.08 and 170.00±0.06 percent respectively. The extract of A. pullulans NRRL 58536 was analyzed using Thin Layer Chromatography (TLC) with aureobasidin A (Ab A) as a comparative standard. The Rf values as 0.68 of A. pullulans NRRL 58536 crude extract was corresponded to that of Ab A observed on TLC plate and two spots of other compounds with different Rf values (0.45 and 0.59) were revealed. The extract containing similar Rf with that of Ab A was further analyzed using TLC, High Performance Liquid Chromatography, Spectrophotometry, MALDI-TOF Mass Spectrometry and 1H-Nuclear Magnetic Resonance techniques. The results showed that A. pullulans NRRL 58536 produced the antifungal agent with characters corresponded to that of Ab A.

จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. สำนักงานวิทยทรัพยากร

Address: กรุงเทพมหานคร

Email: cuir@car.chula.ac.th

Name: สีหนาท ประสงค์สุข

Role: ที่ปรึกษา

Name: หรรษา ปุณณะพยัคฆ์

Role: ที่ปรึกษาร่วม

Created: 2552

Modified: 2563-05-07

Issued: 2563-05-07

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

URL: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/59080

tha

DegreeName: วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Level: ปริญญาโท

Descipline: เทคโนโลยีชีวภาพ

Grantor: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

©copyrights จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	Saowaluk_Ployngam.pdf	3.14 MB

ใช้เวลา

0.029471 วินาที