การวิเคราะห์ดีเอนเอของ Streptomyces spp. ที่ตัดด้วยเรสทริกชันเอนไซม์โดยอะกาโรสเจลอิเลกโทรโฟรีซีส

DNA Restriction analysis of streptomyces spp. by agarose gel electrophoriesis

Name: สมพร ตั๊นสกุล

Abstract: ได้ทำการวิเคราะห์ชิ้นส่วนโครโมโซมอลดีเอนเอของ Streptomycesโดยสกัดแยกโครโมโซมอลดีเอนเอจาก Streptomyces ชนิดต่างๆ ได้แก่ Streptomyces sp. 42-9 หรือ S. griseoruber Streptomyces sp. 190-1 หรือ S.cyaneus S.glaucescens S.coelicolor A3(2) และ S.lividans 1326 ทำให้บริสุทธิ์และตัดอย่างสมบูรณ์ด้วยเรสทริกชันเอนไซม์ type II แยกชิ้นส่วนโครโมโซมอลดีเอนเอโดยการทำ อิเลกโทรโฟรีซีสบนอะกาโรสเจล พบว่าเรสทริกชันเอนไซม์ที่เหมาะสม ซึ่งให้รูปแบบของแถบชิ้นส่วนดีเอนเอที่แตกต่างกันอย่างชัดเจนระหว่าง Streptomyces ชนิดต่างๆ คือBamHI PstI BglII และ EcoRI สภาวะที่ให้การย่อยสมบูรณ์ทำโดยใช้เรสทริกชันเอนไซม์เข้มข้น 6 หน่วย / ไมโครกรัมของดีเอนเอ และย่อยที่อุณหภูมิ 37°ซ เป็นเวลาอย่างน้อย 6 ชั่วโมง พบว่าการเพิ่มความต่างศักย์ซึ่งให้อย่างคงที่ในการทำอิเลกโทรโฟรีซีสจาก 8 โวลต์ / ซม. ของความยาวเจลเป็น 14 โวลต์ / ซม. ของความยาวเจล ทำให้การแยกแถบดีเอนเอชัดเจนยิ่งขึ้น รูปแบบเฉพาะตัวของชิ้นส่วนโครโมโซมอลดีเอนเอของ Streptomyces spp. ทั้ง 5 ชนิดที่ทราบชนิดแน่นอนแล้วมีความแตกต่างกันโดยสิ้นเชิง นอกจากนี้ยังพบว่ารูปแบบเฉพาะตัวของชิ้นส่วนโครโมโซมอลดีเอนเอของ Streptomyces spp. ที่ไม่ทราบชนิดซึ่งนำมาทดสอบ 10 ชนิดมีความแตกต่างจาก Streptomyces spp. ที่ทราบชนิดเหล่านี้อย่างไรก็ตามเนื่องจาก Streptomyces ที่ทราบชนิดที่นำมาศึกษานี้มีจำนวนจำกัด ดังนั้นผลการศึกษานี้จึงยังไม่สามารถจำแนกชนิดของ Streptomyces spp. ที่ไม่ทราบชนิดได้

Abstract: A method for analysis of Streptomyces chromosomal DNA was described. Chromosomal DNAs from various species of Streptomyces namely Streptomyces sp. 42-9 or S. griseoruber, Streptomyces sp.190-1 or S. cyaneus , S. glaucescens , S. coelicolor A3(2) and S. lividans 1326 were extracted and purified. They were completely cut with type II restriction enzymes. The restriction fragments were separated by one dimensional agarose gel electrophoresis. Suitable restriction enzymes that give distinct restriction banding patterns of DNA among these Streptomyces spp. Were BamHI, PstI, BglII and EcoRI. Complete digestion of DNA was performed by incubation with 6 units of enzyme / microgram of DNA at 37℃ for 6 hrs. It was observed that the increase of voltage for agarose gel electrophoresis from 8 V / cm of gel length to 14 V / cm of gel length could increased banding resolution. The restriction fragment fingerprint patterns of the five known Streptomyces spp. were obviously distinguishable. Moreove, the restriction fragment fingerprint patterns of ten unknown Streptomyces spp. Being tested were different from those of the known Streptomyces spp. Therefore, species of the unknown Streptomyces could not be identified at present due to the limited number of known Streptomyces spp.

จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. สำนักงานวิทยทรัพยากร

Address: กรุงเทพมหานคร

Email: cuir@car.chula.ac.th

Name: ไพเราะ ปิ่นพานิชการ

Role: ที่ปรึกษา

Created: 2534

Modified: 2561-05-10

Issued: 2561-05-10

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

URL: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/47982

tha

DegreeName: วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Level: ปริญญาโท

Descipline: จุลชีววิทยา

Grantor: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

©copyrights จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	Somporn_ta_front.pdf	2.75 MB
2	Somporn_ta_ch1.pdf	1.42 MB
3	Somporn_ta_ch2.pdf	945.98 KB
4	Somporn_ta_ch3.pdf	9.89 MB
5	Somporn_ta_ch4.pdf	932.12 KB
6	Somporn_ta_back.pdf	1.35 MB

ใช้เวลา

0.042784 วินาที