การทรานส์ฟอร์ม Spirulina platensis สายพันธุ์อิตาลีโดยการใช้ dominant selectable m

Transformation of Spirulina platensis Italy strain with a dominant selectable ma

Name: มงคล โชตยาภรณ์

Organization : มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี

keyword: Cyanobacteria

; Spn-&na pIarensjs

; Transformation

; Electroporation

; ไซยาโนแบคทีเรีย

; สไปรูไลนา พลาเทนสิส

Abstract: The cyanobacterium Spjru1jna platensis Italy strain was transformed tochloramphenicol resistance with plasmids conferring chloramphenicol acetyltransferase gene(cat) by electroporation. The plasmids were constructed by placing S. platensis genomic DNAfragment in front of the cat gene of a promoter probe vector, pKK232-8 at BamHI site.Four recombinant plasmids, namely, pCTi, pCT*, pCT3, pCTh, conferring chloramphenicolresistant gene were obtained from the selection of Escherichia coli transformants on aselection plate containing chlorarnphenicol at the concentration of 170 l.@ml. Restrictionanalysis of the resulted plasmids revealed that the size of the inserted fragment whichcontained the promoter probe of S. platensis was around 1.2 kilobases. Each of theseplasmids was used to transform S. platens& by electroporation. The optimized condition forelectroporation required 2.Sx105 trichomes of S. platens& 10 pg of plasmid DNA in 140 l.tlof 0.1 mM HEPES pH 7.2 and was performed at the field strength of 4 kV/cm with thetime constant of S millisecond. After electroporation, it is necessary to incubate thentransformation mix at low light intensity (10 pE/m‘/s), 30ฐC for 48 hours prior subjectedto selective pressure. This is to allow the electroporated trichomes to recover and repair thecell membrane as well as to express the chloramphenicol resistant gene. Stabletransformants were obtained after 7 day incubation on Zarrouk’s agar mediumsupplemented with chloramphenicol at the concentration of 1 l.tg/ml 80 pE/mL/s, 3O’C.The transfotmation efficiency were 281, S6, 204, 237 transformants per microgram of thetransformed plasmid DNA, pCTt, pCTZ, pCTs, pCTd, respectively. Analysis of thetransformants by polymerase chain reactions and Southern hybridization indicated thattransformants obtained resulted from car gene which fused with S. p1arensjs promoter shouldintegrate into the chromosome. Moreover, there was no indication of extrachromosomal DNAin the transformants. This implies that the inserted DNA in the recombinant plasmids wasintegrated into the chromosomal DNA. Therefore the transformants were stable for manygenerations upon subculturing in medium supplemented with chloramphenicol at the concentration of 4 pg/ml.

มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี

Address: กรุงเทพมหานคร (Bangkok)

Email: info.lib@mail.kmutt.ac.th

Name: ผศ.ดร. สุภาภรณ์ ชีวะธนรักษ์

Role: อาจารย์ที่ปรึกษา

Name: ดร. ยุวพิน เลิศวีระวัฒน์

Role: อาจารย์ที่ปรึกษา

Created: 2538

Issued: 2005-04-12

Modified: 2006-05-30

วิทยานิพนธ์/Thesis

ISBN: 9746215434

CallNumber: BIT49

tha

DegreeName: วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต

Level: ปริญญาโท

Descipline: เทคโนโลยีชีวภาพ

Grantor: มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี

©copyrights มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีพระจอมเกล้าธนบุรี

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	BIT49.pdf	76.27 MB	17	2020-08-28 16:09:51
2	BIT49ab.pdf	108.31 KB	6	2018-05-13 01:49:15
3	BIT49ab.smi	2.54 KB	4	2018-05-13 01:49:16

ใช้เวลา

0.038399 วินาที