FTIR spectra of Cryptococcus Neoformans and spectral changes of Pseudomonas Aeruginosa and Staphylococcus Aureus

เอฟทีไออาร์สเปกตรัมของคริปโตคอกคัส นีโอฟอร์มานส์ และการเปลี่ยนแปลงของสเปกตรัมของซูโดโมแนส แอรูจิโนซา และสแตฟิโลคอกคัส ออเรียส

Name: Suriyaphongse Kulkeratiyut

LCSH: Bacteria

LCSH: Cryptococcus neoformans

LCSH: Pseudomonas aeruginosa

LCSH: Staphylococcus aureus

Abstract: Culture condition and sample technique of sample preparations are the two important factors for high quality and good reproducibility of the infrared spectra. Two major factors which affect spectra are media components and film preparation. The influence of neighbor colonies occurs from the release or utilization of substances around their colonies. Test results showed the difference in infrared spectrum caused by influence of neighbor colonies in all spectral windows at a 95 % confidence limit. Measuring the diffusion coefficient of water and glucose in culture medium by pulse field gradient-nuclear magnetic resonance (PFG-NMR) indicated the rapid movement of small molecules under cultivative agar medium. Reproducibility of Bacterial film that derived from drying at 42 °C for 1 h generated a more consistency IR spectra than that prepared by vacuum at a 95 % confidence limit. This was especially true in suspension of microorganisms that can form small bubbles during application of the vacuum, which affects the quality of the film. The spectra were significantly different from films dried by vacuum due to the change of fatty acid chain packing and the amount of H-bonded carbonyl in protein which affected protein secondary structure. Configuration changes in macromolecules were also studied by determines the change of the number of H-bonded in protein. Band shift from heating is consistent but of a small extent compared to spectra difference of different strains, hence, the identification of microorganism by IR is possible. This study suggests harvesting bacteria from colonies grown far from other colonies and decreasing the cultivation time to minimize these effects. Control of all conditions during cultivation and sample preparation should always be carefully monitored. The classification of closely relate Cryptococcus neoformans using FT-IR spectroscopy agreed with the karyotyping and MIC of anti-fungal patterns.

Abstract: สภาวะในการเพาะเชื้อและวิธีการเตรียมสิ่งตัวอย่างเป็นปัจจัยที่มีความสำคัญที่ทำให้ได้อินฟราเรด สเปคตรัมที่มีคุณภาพและมีความคงที่สูง ปัจจัยหลักที่สำคัญต่อคุณภาพของสเปคตรัม2ปัจจัยได้แก่ ส่วนประกอบ ของอาหารเลี้ยงเชื้อ และกระบวนการเตรียมฟิล์ม การรบกวนจากนิคมข้างเคียงเกิดจากจุลชีพปล่อยหรือใช้สาร รอบ ๆ นิคม การศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าอินฟราเรดสเปคตรัมของจุลชีพที่ถูกรบกวนโดยนิคมข้างเคียงมีความ แตกต่างกันในเกือบทุก ๆ ช่วงของสเปคตรัมที่ระดับนัยสำคัญร้อยละ 95 และการทดลองนี้ได้วัดสัมประสิทธิ์การ แพร่ของน้ำและกลูโคสในอาหารเลี้ยงเชื้อโดย pulse field gradient–nuclear magnetic resonance (PFG-NMR) โดย พบว่าสารเหล่านี้แพร่ในอาหารเลี้ยงเชื้อได้รวดเร็วมาก ส่วนกระบวนการเตรียมฟิล์มตัวอย่างโดยการอบที่ 42 องศา เซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงให้ความสม่ำเสมอสูงกว่าเมื่อเตรียมโดยการอบภายใต้สูญญากาศที่ระดับนัยสำคัญร้อย ละ 95 โดยเฉพาะในจุลชีพแขวนลอยที่เกิดฟองอากาศขนาดเล็กผุดขึ้นได้ง่ายในระหว่างการอบภายใต้สูญญากาศ ซึ่งจะส่งผลต่อคุณภาพของฟิล์มที่ได้ แต่สเปคตรัมที่ได้จากการเตรียมฟิล์ม 2 วิธีนี้มีความแตกต่างกันเล็กน้อย เนื่องจากการอัดตัวของสายกรดไขมันและปริมาณของหมู่คาร์บอนิลในโปรตีนที่เกิดพันธะไฮโดรเจนเปลี่ยนแปลง ไป ซึ่งมีผลต่อโครงสร้างทุติยภูมิของโปรตีนและส่งผลต่ออินฟราเรดสเปคตรัม การทดลองนี้ได้ทำการศึกษาการ เปลี่ยนแปลงรูปร่างของโมเลกุลขนาดใหญ่อันเนื่องมาจากจำนวนของพันธะไฮโดรเจนระหว่างโมเลกุล เปลี่ยนแปลงไป การเคลื่อนตำแหน่งของพีกที่เกิดจากการสัมผัสความร้อนนั้นเกิดอย่างคงที่ และตำแหน่งของพีก เคลื่อนไปน้อยมากเมื่อเปรียบเทียบกับของสเปคตรัมที่ได้จากจุลชีพต่างสายพันธุ์กัน และผลการทดสอบระบุชนิด ของจุลชีพโดยตัวอย่างที่เตรียมจากทั้ง 2 วิธีนี้ยังให้ผลเป็นเชื้อสายพันธุ์เดียวกันอย่างถูกต้อง การวิจัยนี้แนะนำให้ เก็บเชื้อแบคทีเรียจากนิคมที่เจริญห่างจากนิคมอื่น ๆ และลดเวลาการเลี้ยงเชื้อลงโดยกำหนดเวลาเก็บจุลชีพเมื่อได้ ปริมาณเพียงพอต่อความต้องการเพื่อลดการรบกวนจากการเปลี่ยนแปลงส่วนประกอบของอาหารเลี้ยงเชื้อและ ควบคุมทุกขั้นตอนโดยปฏิบัติตามวิธีที่ได้กำหนดไว้อย่างเข้มงวด โดยเฉพาะการเพาะเชื้อและเตรียมตัวอย่าง การศึกษาการจำแนกคริปโตคอกคัส นีโอฟอร์มานส์ที่เกิดการเปลี่ยนแปลงฟีโนไทป์ไปเล็กน้อยโดย FT-IR ได้ผลสอดคล้องกับข้อมูลจาก karyotype และ รูปแบบของค่า MIC ของยาต้านเชื้อรา

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Byaporn na Nagara

Role: Thesis Advisors

Created: 2004

Modified: 2553-03-30

Issued: 2010-03-19

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

ISBN: 9740455867

CallNumber: TH S961ft 2004

eng

DegreeName: Doctor of Philosophy

Level: Doctoral Degree

Descipline: Medical Technology

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4236019.pdf	8.41 MB	33	2021-01-26 15:40:44

ใช้เวลา

-0.602415 วินาที