Investigation of transformed PRSV cp sequences in transgenic papaya G2

การตรวจวิเคราะห์ยีนโปรตีนเปลือกหุ้มของเชื้อไวรัสจุดวงแหวนที่ถ่ายฝากในมะละกอดัดแปรพันธุกรรม G2

Name: Permchai Itthisoponpisarn

LCSH: Gene silencing -- Thailand

LCSH: Genetic transformation -- Thailand

LCSH: Papaya -- Thailand

LCSH: Plants -- Thailand -- Virus resistance

Abstract: Papaya ringspot virus (PRSV) causes a severe disease in papaya (Carica papaya) throughout the tropical and subtropical areas with significant damage to papaya plantations. The conventional methods failed to control PRSV infection. Transgenic papaya transformed with PRSV cp gene can confer resistance against PRSV. In this thesis, we aimed to study the correlation between PRSV resistance and transformed cp gene in transgenic papaya, in order to understand the resistant mechanism which can be used for development of an effective method for protecting the plant against PRSV. The cp transgene in a transgenic papaya line G2 from our laboratory was analyzed by Southern blot, PCR technique, and DNA sequencing. Determination of cp transgene integration using Pac I and Stu I restriction enzymes exhibited a single band of DNA over 23 kb in size. It was implied that the integration of cp transgene might occur at a single genetic locus in the papaya genome of the transgenic papaya line G2. PCR and DNA sequence analysis showed extensive rearrangement of DNA within the CP cassette in the genome of the transgenic papaya line G2. It comprised of an insertion of plasmid vector pSA1006 backbone, insertion of plant genomic DNA sequences, and rearrangement of cp and uidA transgenes. The rearrangement includes the deletion and insertion of the cp gene in the inverted repeat manner. This rearranged cp gene in the inverted repeat manner may trigger the resistant mechanism against PRSV in transgenic papaya line G2

Abstract: ไวรัสโรคใบด่างจุดวงแหวนในมะละกอเป็นโรคที่สำคัญซึ่งสร้างความเสียหายเป็นอย่าง มากต่อการปลูกมะละกอทั้งในประเทศไทยและทั่วโลก การควบคุมการระบาดของโรคด้วยวิธี ดั้งเดิมยังไม่ประสบผลสำเร็จ ในขณะที่มะละกอดัดแปรพันธุกรรมที่มีการถ่ายยีนโปรตีนเปลือก หุ้มของไวรัสสามารถต้านทานไวรัสได้ ในการวิจัยนี้จึงทำการศึกษาความเกี่ยวข้องระหว่างการ ต้านทานไวรัสยีนโปรตีนเปลือกหุ้มไวรัสที่ใส่เข้าไปในมะละกอดัดแปรพันธุกรรมเพื่อให้ สามารถเข้าใจกลไกการต้านทานไวรัสและนำไปใช้พัฒนาวิธีการป้องกันไวรัสให้มีประสิทธิภาพ มากขึ้น การวิเคราะห์ยีนโปรตีนเปลือกหุ้มของไวรัสที่ถูกถ่ายฝากทำโดยใช้เทคนิค Southern blot, PCR และการตรวจลำดับนิวคลีโอไทด์ (DNA sequencing) การตรวจตำแหน่งการแทรก ตัวของยีนโปรตีนเปลือกหุ้มด้วยวิธี Southern blot analysis โดยใช้เอ็นไซม์ตัดจำเพาะ Pac I และ Stu I พบว่ามีแถบของดีเอ็นเอขนาดใหญ่กว่า 23 กิโลเบส 1 แถบ ทั้งในดีเอ็นเอที่ตัดด้วย เอ็นไซม์ Pac I และ Stu I ซึ่งแสดงว่าการแทรกตัวของยีนโปรตีนเปลือกหุ้มของไวรัสน่าจะ เกิดขึ้นที่ตำแหน่งเดียวในดีเอ็นเอของมะละกอดัดแปรสายพันธุ์ G2 การวิเคราะห์โดยวิธี PCR และการตรวจหาลำดับเบสพบว่ามีการจัดเรียงตัวใหม่เกิดขึ้น ภายในชุดของยีนโปรตีนเปลือกหุ้มของไวรัสนี้พบในมะละกอดัดแปรพันธุกรรม G2 การจัดเรียง ตัวการแทรกตัวของชิ้นส่วนโครงร่างของพลาสมิด pSA1006, การแทรกตัวของดีเอ็นเอของพืช, และการเรียงตัวใหม่ของยีนโปรตีนเปลือกหุ้มไวรัสและยีนเบต้ากลูคูโรนิเดส ลักษณะการเรียงตัว ใหม่ของยีนดังกล่าวมีทั้งการขาดหายไปและการเรียงตัวแบบกลับกันของยีนโปรตีนเปลือกหุ้ม การจัดเรียงตัวที่มีลักษณะแบบกลับกันของยีนไวรัสโปรตีนเปลือกหุ้มที่ถ่ายฝากน่าจะมีบทบาท สำคัญในการกระตุ้นให้เกิดกลไกการต้านทานไวรัสในมะละกอดัดแปรพันธุกรรม G2

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Juricek, Miloslav

Role: Thesis Advisors

Created: 2004

Modified: 2553-03-16

Issued: 2010-02-09

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

ISBN: 9740446701

CallNumber: TH P451i 2004

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Molecular Genetics and Genetic Engineering

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4336309.pdf	3.04 MB	25	2020-04-20 10:33:05

ใช้เวลา

0.304085 วินาที