Vitrification-based cryopreservation of Vanda Coerulea Griff. Ex Lindl

การเก็บรักษาเชื้อพันธุ์กล้วยไม้ฟ้ามุ่ยที่อุณหภูมิต่ำกว่าจุดเยือกแข็งโดยวิธี vitrification

Name: Nipawan Jitsopakul

MeSH: Random Amplified Polymorphic DNA Technique

LCSH: Vanda Coerulea

LCSH: Cryopreservation of organs, tissues, etc

LCSH: Orchid culture -- Micropropagation

LCSH: Orchid culture -- Cryopreservation

Abstract: Vanda coerulea is a rare Thai orchid that faces problems in conservation attempts that is desired in this research. The effects of media (modified Vacin and Went 1949 (VW), Murashige and Skoog 1962 (MS)), sucrose concentrations (0-30 g/l) and plant growth regulators (BA, TDZ and NAA) were studied on micropropagation of Vanda coerulea from shoot tips. Shoot tips cultured on VW agar medium supplemented with 10 g/l sucrose showed higher shoot and root formation than those cultured on MS medium. Addition of 1 mg/l BA to VW agar medium was found to be the best for induction of shoots from shoot tips. The combination of 0.5 mg/l NAA and 2 mg/l TDZ was found to be the best for root formation from shoots. Survival rate of plantlets cultured in the greenhouse was 100%. There was no difference in morphology and similar patterns of ploidy level of stock plants and regenerated plants. Seeds of Vanda coerulea were successfully cryopreserved using direct plunging into liquid nitrogen, vitrification, encapsulation-dehydration and encapsulation-vitrification. The manipulation of encapsulated seeds was much easier than vitrification. Protocorms, shoot tips and protocorm-like bodies of Vanda coerulea were successfully cryopreserved by encapsulation-dehydration in combination with loading solution, slow freezing and droplet-vitrification, respectively. The highest regrowth of cryopreserved protocorms was 40% with 35% water content after 8 h dehydration. The survival rate of cryopreserved shoot tips and cryopreserved protocorm-like bodies without exposing to PVS2 solution was 20% and 5 %, respectively. The RAPD marker was able to be efficiently used for estimating the genetic variation of plantlets. The same RAPD patterns of noncryopreserved and cryopreserved protocorm-like bodies were observed. The size and sequences of the trnL (UAA) region of cpDNA for non-cryopreserved and cryopreserved protocorm-like bodies were not different. There was no difference in morphology and similar patterns of ploidy levels of non-cryopreserved and cryopreserved plantlets. The successful development of the methods will lead to more successful preservation of Vanda coerulea

Abstract: การศึกษาผลของสูตรอาหาร (สูตรดัดแปลง Vacin and Went 1949 (VW), Murashige and Skoog 1962 (MS)) และความเข้มข้นของน้ำตาลซูโครส (0-30 กรัมต่อลิตร) ต่อการขยายพันธุ์ของ กล้วยไม้ฟ้ามุ่ยจากปลายยอด ผลการทดลองพบว่าเมื่อเลี้ยงปลายยอดบนอาหารสูตรดัดแปลง VW ที่เติม น้ำตาลซูโครส 10 กรัมต่อลิตร สามารถให้จำนวนยอดและรากเฉลี่ยสูงกว่าเมื่อเลี้ยงบนอาหารสูตร MS การศึกษาผลของสารควบคุมการเจริญเติบโต (BA TDZ และ NAA) ต่อการชักนำให้ปลายยอดเกิดยอด และรากของกล้วยไม้ฟ้ามุ่ย พบว่าเมื่อเลี้ยงปลายยอดบนอาหารที่เติม BA ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัมต่อลิตร ให้จำนวนยอดเฉลี่ยสูงสุด และอาหารที่เติม NAA ความเข้มข้น 0.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ร่วมกับ TDZ ความ เข้มข้น 2 มิลลิกรัมต่อลิตร ให้จำนวนยอดที่ผลิตรากและจำนวนรากเฉลี่ยสูงสุด อัตราการรอดชีวิตของต้น กล้วยไม้ฟ้ามุ่ยเมื่อเลี้ยงในสภาพโรงเรือนเฉลี่ยร้อยละ 100 การขยายพันธุ์ต้นกล้วยไม้ฟ้ามุ่ยจากปลายยอด ไม่พบการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาและการเปลี่ยนแปลงชุดของโครโมโซม เมล็ดกล้วยไม้ฟ้ามุ่ยสามารถเก็บรักษาโดยวิธีการเก็บในไนโตรเจนเหลวโดยตรง vitrification, encapsulation-dehydration และ encapsulation-vitrification การทดลองพบว่าการเก็บรักษาเมล็ดในรูป เมล็ดเทียม (encapsulation) ง่ายกว่าการเก็บรักษาโดยวิธี vitrification การเก็บรักษาโปรโตคอร์มของ กล้วยไม้ฟ้ามุ่ยโดยวิธี encapsulation-dehydration ร่วมกับสารละลาย loading พบว่าโปรโตคอร์มสามารถ เจริญเป็นต้นกล้าได้สูงสุดเฉลี่ยร้อยละ 40 เมื่อใช้ลมเป่าเป็นเวลา 8 ชั่วโมง ซึ่งมีปริมาณน้ำในเมล็ดร้อยละ 35 การเก็บรักษาปลายยอดโดยวิธี slow freezing และการเก็บรักษา protocorm-like bodies โดยวิธี droplet-vitrification โดยไม่ได้แช่สารละลาย PVS2 พบว่าอัตราการรอดชีวิตสูงสุดเฉลี่ยร้อยละ 20 และ 5 ตามลำดับ การเก็บรักษา protocorm-like bodies ในไนโตรเจนเหลวไม่พบการเปลี่ยนแปลงทางลักษณะ ทางพันธุกรรมเมื่อทดสอบด้วยเทคนิค RAPD และไม่พบว่ามีการเปลี่ยนแปลงขนาดและลำดับเบสบริเวณ trnL (UAA) ของ cpDNA ชุดของโครโมโซมและสัณฐานวิทยาเมื่อเปรียบเทียบกับ protocorm-like bodies ที่ไม่ได้เก็บรักษาในไนโตรเจนเหลว

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Kanchit Thammasiri

Role: Thesis Advisors

Created: 2008

Modified: 2020-04-19

Issued: 2009-11-26

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

CallNumber: TH N719v 2008

eng

DegreeName: Doctor of Philosophy

Level: Doctoral Degree

Descipline: Biotechnology

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4736176.pdf	6.46 MB	114	2022-11-09 14:45:01

ใช้เวลา

-0.586972 วินาที