Development of monoclonal antibodies to polyhedrin of monodon baculovirus

การพัฒนาโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อโพลีฮีดรินของเชื้อโมโนดอนแบคคูโลไวรัสในกุ้งกุลาดำ

Name: Chumphol Boonsanongchokying

MeSH: Diatrizoate Meglumine

MeSH: Antibodies, Monoclonal

MeSH: Immunohistochemistry

LCSH: Penaeus monodon

Abstract: Monodon baculovirus (MBV) is one member of the nucleopolyhedrosis virus (NPV) group that produces occlusion bodies that contain virions in epithelial cells of the hepatopancreas of the peinaeid shrimp Penaeus monodon. The major constituent protein of occlusion bodies is polyhedrin. Polyhedrin protein of MBV was extracted from infected hepatopancreas of P. monodon post larvae using Urografin gradient ultracentrifugation. A fraction at 50% Urografin was examined by electronmicroscopy that contained purified-polyhedrin protein particles of 20-23 nm diameters. This fraction was also analyzed by SDS-PAGE and yielded a single band of purified-polyhedrin at a molecular weight of 58 kDa. Therefore, purified polyhedrin was used to produce monoclonal antibodies in order to provide an immunological tool for detection of the virus. Seventeen monoclonal antibodies were obtained and reacted with 58 kDa purified-polyhedrin MBV. All of the monoclonal antibodies were specific to MBV without cross-reactivity to other viruses (HPV, YHV, and WSSV) based on immunohistochemistry. The antibodies could be used to detect purified-polyhedrin with high sensitivity up to 0.2 μg/ml by dot blot assay. Moreover, antibodies could be used to detect MBV infection in tissue by immunohistochemistry. Therefore, this study provides an immunological tool for specific detection of MBV in infected shrimp. Further development of highly sensitive assays and convenient kits using these monoclonal antibodies for detection of MBV are in progress.

Abstract: การสกัดโปรตีนโพลีฮีดริน (polyhedrin) ของเชื้อโมโนดอนแบคคูโลไวรัสในกุ้งกุลาดำ (MBV) จากตับกุ้งกุลาดำในระยะตัวอ่อน (post larvae, PL) โดยการปั่นตกตะกอนอย่างหนัก ด้วย 20-60% Urografin สามารถแยกแถบโปรตีนได้ที่ 50% Urografin เมื่อนำไปตรวจด้วย กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนพบว่าสามารถสกัดโปรตีนโพลีฮีดรินบริสุทธิ์ที่มีอนุภาคขนาดเส้น ผ่านศูนย์กลางประมาณ 20-23 นาโนเมตร จากการวิเคราะห์หาน้ำหนักของโปรตีนด้วยวิธี SDSPAGE พบแถบโปรตีนหลักที่มีน้ำหนักประมาณ 58 กิโลดาลตัน ในงานวิจัยนี้จึงใช้โปรตีนโพ ลีฮีดรินบริสุทธิ์ที่สกัดได้ในการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดี เพื่อใช้วินิจฉัยไวรัสบนพื้นฐาน ของอิมมูโนวิทยา โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ผลิตได้มี 17 ชนิด พบว่าทั้งหมดทำปฏิกิริยาจำเพาะ ต่อโปรตีนที่น้ำหนักโมเลกุล 58 กิโลดาลตัน ของ MBV แต่ไม่ทำปฏิกิริยาข้ามกับไวรัสชนิดอื่น (HPV, YHV, และ WSSV) นอกจากนี้โมโนโคลนอลแอนติบอดีบางชนิดสามารถนำมา ตรวจหาโพลีฮีดรินของเชื้อโมโนดอนแบคคูโลไวรัสด้วยความไวสูงในระดับ 0.2 ไมโครกรัมต่อ มิลลิลิตรโดยวิธี dot blot และสามารถตรวจติดตามการติดเชื้อโมโนดอนแบคคูโลไวรัสใน เนื้อเยื่อกุ้งกุลาดำด้วยวิธี immunohistochemistry ดังนั้นการศึกษานี้ทำให้ได้วิธีในการวินิจฉัย กุ้งที่ติดเชื้อโมโนดอนแบคคูโลไวรัสด้วยวิธีทางอิมมูโนวิทยา และคาดว่าจะสามารถนำโมโน โคลนอลที่ผลิตได้ไปเตรียมชุดตรวจสำเร็จรูปที่มีความไวเพื่อใช้ในการติดตามเชื้อโมโนดอนแบค คูโลไวรัสต่อไป

Mahidol University

Address: NAKHON PATHOM

Email: liwww@mahidol.ac.th

Name: Flegel, Timothy W.

Role: Thesis Advisors

Created: 2009-07-03

Modified: 2553-06-22

Issued: 2009-07-03

วิทยานิพนธ์/Thesis

application/pdf

ISBN: 9740462111

CallNumber: TH C559d 2005

eng

DegreeName: Master of Science

Level: Master's Degree

Descipline: Biotechnology

Grantor: Mahidol University

©copyrights Mahidol University

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	4636282.pdf	1.61 MB	18	2023-06-13 15:15:45

ใช้เวลา

0.240993 วินาที