แอลคาไลน์โปรติเอสจาก Bacillus subtilis mutant UUNN-1 และภาวะที่เหมาะสมของการผลิตของในถังหมักขนาด 5 ลิตรแบบไม่ต่อเนื่อง : รายงานผลวิจัย

Alkaline protease from Bacillus subtilis mutant UUNN-1 and optimized condition production in 5 liter batch fermenter

Name: นภา ศิวรังสรรค์

Organization : จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. ภาควิชาชีวเคมี

ThaSH: อัลคาไลน์โปรติเอส

ThaSH: บาซิลลัสซับไทลิส

ThaSH: การกลายพันธุ์

ThaSH: เอนไซม์ -- การผลิต

Abstract: Bacillus subtilis สายพันธุ์กลาย UUNN-1 สามารถผลิตแอลคาไลน์โปรติเอสได้ในปริมาณสูงในถังหมักขนาด 5 ลิตร แบบไม่ต่อเนื่อง โดยใช้สูตรอาหารที่ ปริมาณไนโตรเจนจากสารสกัดจากกากถั่วเหลืองผสมกากเมล็ดดอกทานตะวัน เท่ากับ 0.4%(w/v), KH[subscript 2]PO[subscript 4] 0.1%(w/v), MgSO[subscript 4].7H[subscript 2]O 0.05%(w/v), CaCl[subscript 2].2H[subscript 2]O 0.001%(w/v) ค่าความเป็นกรด-ด่างเท่ากับ 7.0 ปริมาณเชื้อเริ่มต้นเท่ากับ 1.0%(v/v) ควบคุมอุณหภูมิที่ 37 องศาเซลเซียส อัตราการกวน 250 รอบต่อนาที อัตราการเติมอากาศ เท่ากับ 1.0 vvm ในปริมาณทั้งสิ้น 3.5 ลิตร ทำการผลิตได้ 1,579 ยูนิตต่อกรัมเซลล์แห้งรวมใช้ระยะเวลาในการหมัก 36 ชั่วโมง ทำการแยกให้บริสุทธิ์โดยการตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต 40-60 เปอร์เซ็นต์อิ่มตัว กำจัดเกลือโดยวิธี dialysis แล้วทำโครมาโตกราฟีแบบคอลัมน์ด้วย ดีอีเอ อี-เซลลูโลส และ เซฟาเด็กซ จี-100 ตามลำดับ ได้แอลคาไลน์โปรติเอสมีความบริสุทธ์เพิ่มขึ้น 165 เท่า และค่าแอคติวิตีจำเพาะเท่ากับ 1,688 ยูนิตต่อมิลลิกรัมโปรตีน ซึ่งเอนไซม์นี้มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 27,000 ดาลตัน จากวิธีเจลโครมาโตรกราฟี เร่งปฏิกิริยาการย่อยสลายโปรตีนที่ ช่วงอุณหภูมิ 30-65 องศาเซลเซียส และช่วงค่าความเป็นกรด-ด่างเท่ากับ 8.5-10 และเหมาะสมที่ 45 องศาเซลเซียส ค่าความเป็นกรด-ด่างเท่ากับ 10.5 มีค่า K[subscript m] ต่อเคซีนเท่ากับ 0.101 mM และ V[subscript max] ต่อเคซีนเท่ากับ 0.0087 mM/min และถูกยับยั้งโดยสาร phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)

Abstract: Bacillus mutant UUNN-1 can produce high amount of alkaline protease in 5 liter batch fomenter. Culture medium contains KH[subscript 2]PO[subscript 4] 0.1%(w/v), MgSO[subscript 4].7H[subscript 2]O 0.05%(w/v), CaCl[subscript 2].2H[subscript 2]O 0.001%(w/v) and extraction of soy been meal and sunflower seed meal with nitrogen content 0.4%(w/v) in total volume of 3.5 liter. The optimal conditions for culturing were as follows : inoculum size at 1%(v/v) of the culture volume, aeration rate at I vvm, agitation speed of 250 rpm, temperature at 37 degree Celsius and initial pH at 7.0. This strain can produce the highest amount of alkaline protease 1,579 units/gram cell dry weight at 36 hours. The protease was partially purified by ammonium sulfate precipitation at 40-60%(w/v), DEAE-cellulose and Sephadex G-100 column chromatography. The purification was 165 fold with specific activity of 1,688 units/mg protein. The molecular weight that was estimated with Sephadex G-100 chromatography is 27,000 Dalton. The enzyme has protease activity at temperature 30-65 degree Celsius, pH 8.5-10.5 and optimum temperature at 45 degree Celsius, pH 10.5. The partially purified enzyme showed K[subscript m] of 0.083% by weight for casein and V[subscript max] of 0.0087 OD/min for casein and protease activity was inhibited by phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF).

จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

Address: กรุงเทพมหานคร

Email: cuir@car.chula.ac.th

Name: ทุนวิจัยกองทุนรัชดาภิเษกสมโภช

Created: 2543

Modified: 2551-10-13

Issued: 2551-10-12

งานวิจัย/Research report

application/pdf

CallNumber: วท 15 010935

tha

©copyrights จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	napa_si.pdf	7.52 MB	190	2025-03-22 00:34:59

ใช้เวลา

0.025317 วินาที