การทำให้บริสุทธิ์บางส่วนและการตรวจสอบลักษณะเฉพาะของไลเปสจาก Pseudomonas aeruginosa : รายงานผลการวิจัย

Partial purification and characterization of lipase from Pseudomonas aeruginosa

Name: นภา ศิวรังสรรค์

Organization : จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์. ภาควิชาชีวเคมี

ThaSH: แบคทีเรีย -- การเพาะเลี้ยงและอาหารเพาะเชื้อ

ThaSH: ไลเปส

ThaSH: เอนไซม์

Abstract: Pseudomonas aeruginosa เป็นแบคทีเรียที่แยกได้จากตะกอนในบ่อเลี้ยงกุ้งในประเทศไทย สามารถถูกชักนำให้ผลิตเอนไซม์ไลเปสสูงขึ้นได้โดยเลี้ยงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส pH 7.0 ในอาหารสูตรปรับต่ำที่มี 0.13 % (NH[subscript4])[subscript2SO[subscript4] เป็นแหล่งไนโตรเจนและมี 2% ฟรุกโตสเป็นแหล่งคาร์บอน และพบว่าการผลิตไลเปสถูกกดดันในสภาวะที่มีกลูโคสด้วยกระบวนการคาตาบอไลต์รีเพรสชั่น เมื่อทำให้ crude เอนไซม์เข้ม้นขึ้นโดยอุลตราฟิลเตรชั่นและแยกโดย Sephadex G-100 คอลัมน์โครมาโตกราฟีเอนไซม์ไลเปสที่ความบริสุทธิ์ขึ้น 10.92 เท่า จากการศึกษาสมบัติของไลเปสที่มีความบริสุทธิ์บางส่วนนี้ พบว่าเอนไซม์ประกอบด้วยหน่วยย่อยที่มีน้ำหนักโมเลกุล 63,000 ดาลตัน pH และอุณหภูมิที่เหมาะสมในการเร่งปฏิกิริยาคือ 6.5 และ 35 องศาเซลเซียส แคลเซียมไอออนช่วยกระตุ้นการทำงานของเอนไซม์ การทำงานของเอนไซม์ถูกยับยั้งอย่างสมบูรณ์ด้วยแมงกานีสไอออน กต่ถูกยับยั้งบางส่วนด้วยไอออนของเหล์ก (2+) , แมกนีเซียมไอออน, EDTA และ SDS เอนไซม์ไฮโดรไลซ์ได้ทั้งสับสเตรทที่เป็นกรดไขมันสายสั้นและสายยาวโดยน้ำมันมะกอกเป็นสับสเตรทที่ดีที่สุดในสภาวะที่ทำการทดลองโดยค่า Km ต่อน้ำมันมะกอกเท่ากับ 4.09 มก./มล. ที่ 37 องศาเซลเซียส และ pH 7.0 เอนไซม์มีความคงตัวในช่วง pH 6.0-7.5 ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส และมีความคงตัวในช่วงอุณหภูมิ 30-40 องศาเซลเซียส ที่ pH 6.0

Abstract: A chemical-defined medium with 0.13% ammonium aulphate as nitrogen source and 2% frutose as carbon source at pH 7.0 and 37 celsius degree were the most suitable culturing condition for the prodution of extracellular lipase by a local strain of Pseudomonas aeruginosa. Glucose was found to repress on the lipase production through catabolite repression. Lipase from P. aeruginosa was partial purified 10.92 fold by using ultrafiltration and Sephadex G-100 gel chromatography. The partial purified enzyme was a complex of subunites with molecular weight of 63,000. The optimum pH and temperature were 6.5 and 35 degree celsius, respectively. The enzyme was able to hydrolyse both long chain fatty acyl ester and short chain fatty acyl ester of glycerol. Enzyme activity was activated by calcium ion but was completely inhibited by Mn[supersciprt 2+] and was partially inhibited by Fe[supersript 2+], EDTA and SDS. The Km for the pirified lipase with olive oil was found to be 4.09 mg./ml. at 37 degree celsius and then assayed at pH 6.0 and 37 degree celsius, the purified enzyme was found to be stable in the pH rang 6.0-7.5. The purified enzyme was stable over 30-40 degree celsius at pH 6.0.

จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

Address: กรุงเทพมหานคร (Bangkok)

Name: ทุนงบประมาณแผ่นดินปี 2540

Created: 2540

Issued: 2005-12-08

Modified: 2005-12-08

งานวิจัย/Research report

URL: http://thailis-db.car.chula.ac.th/CU_DC/October2005/research/Napa(par).pdf

tha

©copyrights จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

ลำดับที่.	ชื่อแฟ้มข้อมูล	ขนาดแฟ้มข้อมูล	จำนวนเข้าถึง	วัน-เวลาเข้าถึงล่าสุด
1	Napa(par).pdf	6.75 MB	103	2020-04-19 01:18:32

ใช้เวลา

0.034696 วินาที